Direct reprogramming of somatic cells by epithelial-mesenchymal transition

通过上皮间质转化直接重编程体细胞

基本信息

批准号：
22K06808
负责人：
本橋力
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

令和4年度においては、以下の2つの研究を行った。研究1 EMT現象によるゲノムのエピジェネティック状態変化の解析：EMTが起きるとゲノムにエピジェネティック変化が生じ、それにともなって転写の活性が高いクロマチン状態に変化するのではないかと考え、マウス乳腺上皮細胞NMuMGを用いてその検証を行った。NMuMG細胞にEMT関連転写因子（4EMT-TFs）をレトロウィルスにより感染・過剰発現させてEMTを起こし、経日的に細胞をサンプリングし、Histone H3の9番目のLysのTri-Methylationに対する抗体（抗H3K9me3）とHeterochromatin associated proteins 1γ(HP1γ)に対する抗体(抗HP1γ)で免疫染色してクロマチン状態を解析した。一般に転写の活性が高いユークロマチン状態ではH3K9のTri-MethylationとHP1γは減じているといわれているが、EMTの前後でNMuMG細胞の核内の抗H3K9me3陽性率と抗HP1γ陽性率に違いは見られず、両者が減じている証拠は得られなかった。最近では、転写の活性が高いユークロマチン状態でも両者にはあまり変化はないという報告もあるため、違う指標も組み合わせてクロマチン状態の比較解析を行う予定である。研究2 EMT現象を利用したダイレクトリプログラミング法の検討：我々はこれまで神経堤細胞へのダイレクトリプログラミングの研究を通して、EMT現象が細胞にダイレクトリプログラミングされやすい環境を提供している可能性について検討してきた。本年度は、このことを乳腺上皮細胞の心筋細胞へのダイレクトリプログラミングで検証することを計画し、心筋細胞へのダイレクトリプログラミングに必要な転写因子のレトロウィルスベクターの構築と感染条件の検討を行った。

2020财年，我们进行了以下两项研究。研究1 EMT现象引起的基因组表观遗传状态变化分析：我们认为当EMT发生时，基因组发生表观遗传变化，染色质状态转变为高转录活性的状态，我们进行了验证。使用。使用逆转录病毒感染EMT相关转录因子（4EMT-TF）并过度表达以引起EMT，并在一段时间内对细胞进行采样，通过使用针对HP1γ的抗体（抗HP1γ）进行免疫染色来分析染色质状态。 H3K9me3) 和异染色质相关蛋白 1γ (HP1γ)。虽然一般认为在转录活性较高的常染色状态下H3K9三甲基化和HP1γ降低，但NMuMG细胞核内抗H3K9me3阳性率和抗HP1γ阳性率前后并无差异。 EMT 后没有证据表明两者都在下降。最近有报道称，即使在转录活性较高的常染色质状态下，两者也没有太大变化，因此我们计划结合不同指标对染色质状态进行对比分析。研究2 利用EMT现象检验直接重编程方法：通过对神经嵴细胞的直接重编程的研究，我们研究了EMT现象提供促进细胞直接重编程的环境的可能性。今年，我们计划通过将乳腺上皮细胞直接重编程为心肌细胞来验证这一点，并将构建心肌细胞直接重编程所需的转录因子的逆转录病毒载体并检查感染状况。