Mechanistic study of sulfa drug-induced severe cutaneous adverse reactions by focusing on HLA-A*11:01

以HLA-A*为重点的磺胺类药物致严重皮肤不良反应机制研究11:01

• 批准号: 22K06738
• 负责人: 中村 亮介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06738/
• 关键词: 重症薬疹; サルファ剤; HLA-A*11:01

本研究は、サルファ剤の使用によって引き起こされる日本人のStevens-Johnson症候群／中毒性表皮壊死症、薬剤過敏症症候群等の重症薬疹に、HLA-A*11:01が有意（オッズ比9.84）に関連していることを世界で初めて発見した申請者らの独自の成果に立脚し、同HLAを中心にサルファ剤による重症薬疹が発症するメカニズムを分子病態学的に解明しようとするものである。今年度は、各種のHLA-A3 supertype（HLA-A*11:01、A*03:01、A*31:01、A*33:01）を発現するB細胞株等を用い、サルファ剤（スルファメトキサゾール；SMX等）や各種代謝物（SMXニトロソ体、N-ヒロドキシ体等）および陰性対照を暴露した際の、小胞体ストレス分子（BiP、sXBP-1等）の発現や、細胞表面へのHLA分子の発現およびそのコンフォメーション、細胞生存率へ与える影響等を解析した。HLA発現は、汎HLA特異的抗体の他、変性したHLA-Aに優先的に結合する抗体や、HLA-A11特異的抗体等を用い、フローサイトメトリーにより測定した他、蛍光顕微鏡を用いて細胞膜表面への発現量を調べた。また、逆転写PCR、リアルタイムPCR、ウェスタンブロッティング、免疫沈降法により、mRNAの発現やタンパク質の発現と分子量、糖鎖修飾の有無、さらにβ2マイクログロブリンとの結合性を調べた。さらに、細胞生存率への影響については、テトラゾリウム塩を用いる比色法、ルシフェラーゼを用いる発光法、電気抵抗の経時変化を用いるラベルフリー法を用いた。一部のHLAで細胞表面への発現量およびそのコンフォメーションの異常が認められたが、概ねサルファ剤への暴露は明瞭な小胞体ストレスを誘導することはなく、細胞生存率への影響も僅かであった。次年度は、HLA-A*11:01を発現する肝細胞を樹立して解析を進める。

本研究表明，HLA-A*11:01 与日本患者因使用磺胺类药物引起的 Stevens-Johnson 综合征/中毒性表皮坏死和药物过敏综合征等严重药疹显着相关（比值比 9.84）。该项目是世界上第一个发现这些药物相关的申请人的独特成果，旨在从分子角度阐明磺胺类药物引起的严重药疹发生的机制，以HLA为中心。今年，各种HLA-A3使用表达超型（HLA-A*11:01、A*03:01、A*31:01、A*33:01）的 B 细胞系、各种代谢物（SMX 亚硝基形式、阴性对照（N-羟基等）对内质网应激分子（BiP、sXBP-1等）表达、细胞表面HLA分子表达、构象及细胞存活率的影响和阴性对照等进行分析。使用泛HLA特异性抗体、优先结合变性HLA-A的抗体和HLA-A11特异性抗体通过流式细胞术测量HLA表达，以及使用荧光显微镜测量细胞膜表面的表达水平。被调查。此外，我们还使用逆转录 PCR、实时 PCR、蛋白质印迹和免疫沉淀研究了 mRNA 表达、蛋白质表达、分子量、糖基化的存在以及与 β2 微球蛋白的结合。此外，关于对细胞活力的影响，我们使用了使用四唑盐的比色法、使用荧光素酶的发光法以及使用电阻随时间变化的无标记法。虽然观察到细胞表面一些HLA的表达水平和构象异常，但一般来说，暴露于磺胺类药物不会引起明显的内质网应激，并且对细胞活力仅产生轻微影响。明年，我们将建立表达HLA-A*11:01的肝细胞并进行分析。

项目成果

日本人におけるスルホンアミド系薬剤による重症薬疹の発症とHLA-A*11:01の関連

日本人HLA-A*11:01与磺胺类药物引起的重症药疹发病的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: R Nakamura;N Arakawa;Y Tanaka;N Uchiyama;A Sekine;Y Mashimo;K Tsuji;T Kagawa;K Sato;M Watanabe;M Aiso;Y Hiasa;Y Takei;H Ohira;M Ayada;E Tsukagoshi;K Maekawa;M Tohkin;Y Saito;H Takikawa;中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸
• 通讯作者: 中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸

日本人におけるサルファ剤による重症薬疹の発症とHLA-A*11:01の関連

日本人HLA-A*11:01与磺胺类药物严重药疹发病的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: R Nakamura;N Arakawa;Y Tanaka;N Uchiyama;A Sekine;Y Mashimo;K Tsuji;T Kagawa;K Sato;M Watanabe;M Aiso;Y Hiasa;Y Takei;H Ohira;M Ayada;E Tsukagoshi;K Maekawa;M Tohkin;Y Saito;H Takikawa;中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸;中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸
• 通讯作者: 中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸