抑制制御分子発現制御システムによる新規マスト細胞活性化シグナル伝達分子の探索

使用抑制性控制分子表达控制系统寻找新型肥大细胞激活信号转导分子

• 批准号: 16790074
• 负责人: 中村 亮介
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790074/
• 关键词: マスト細胞; シグナル伝達; 抑制制御分子; SLAP; CISH; デキサメタゾン

本研究は、シグナル伝達の抑制制御分子の発現制御システムを用い、アレルギー反応において重要な役割を果たしているマスト細胞のIgE受容体を介するシグナル伝達を詳細に解析しようというものであった。申請者は、特に抑制制御分子SLAP (Src-like adaptor protein)およびCISH (cytokine-inducible SH2 containing protein)に着目し、RNA干渉法を用いてこれらの分子の発現制御システムを構築し、マスト細胞の活性化を解析しようと試みた。まず、申請者はRT-PCR、5'/3'-RACE法によりラットSLAPの完全長cDNAを単離することに成功した。その結果、ラットSLAP cDNAは846塩基から成り、ヒトおよびマウスのオルソログとアミノ酸配列にしてそれぞれ86%および94%の相同性があることが分かった。これを基にラットSLAPのC末端側の14残基のペプチド(RKSSLFSAPQYFED)に対するウサギ抗血清を作製し、RNA干渉法によるSLAPタンパク質の発現解析を行なったところ、本実験系に用いたラット培養マスト細胞株RBL-2H3細胞は、siRNA (short interference RNA)の導入効率が悪く、当初想定していたほどのタンパク質レベルの発現ノックダウン効果が得られないことがわかった。そこで、発現解析に関してはmRNAの網羅的発現解析を行なうことにした。その結果、SLAPはマスト細胞の抗原による高親和性IgE受容体の架橋シグナルによりその発現が誘導され、刺激から3時間後に発現のピークを迎えることが分かった。一方、サイトカインシグナルの抑制制御分子であるCISHの発現は12時間後にピークを迎え、両抑制制御分子は、マスト細胞活性化の異なるステージにおいてアレルギー反応の抑制に関与する可能性が示唆された。

本研究旨在利用控制抑制和控制信号转导的分子表达的系统，详细分析肥大细胞 IgE 受体介导的信号转导，该受体在过敏反应中发挥重要作用。申请人特别关注抑制控制分子SLAP（Src样衔接蛋白）和CISH（细胞因子诱导的SH2含有蛋白），并利用RNA干扰构建了控制这些分子表达的系统，并开发了一种系统来控制这些分子的表达。尝试分析这些分子的表达。首先，申请人利用RT-PCR和5'/3'-RACE方法成功分离了大鼠SLAP的全长cDNA。结果显示，大鼠SLAP cDNA由846个碱基组成，与人和小鼠直系同源物的氨基酸序列同源性分别为86%和94%。在此基础上，我们制备了针对大鼠SLAP C端侧的14个残基肽（RKSSLFSAPQYFED）的兔抗血清，并通过RNA干扰方法分析了SLAP蛋白的表达，发现siRNA（短链）的导入效率与该蛋白的导入效率有显着差异。干扰RNA)进入细胞系RBL-2H3细胞效果较差，无法获得最初预期的蛋白水平表达敲低效果。因此，我们决定对mRNA进行全面的表达分析。结果表明，SLAP表达是由肥大细胞抗原的高亲和力IgE受体交联信号诱导的，并在刺激后3小时达到表达峰值。另一方面，细胞因子信号的抑制性控制分子CISH的表达在12小时后达到峰值，表明这两种抑制性控制分子可能参与抑制肥大细胞激活不同阶段的过敏反应。

项目成果

Gene expression profiling of dexamethasone-treated RBL-2H3 cells : induction of anti一inflammatory molecules.

地塞米松处理的 RBL-2H3 细胞的基因表达谱：抗炎分子的诱导。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Immunology Letters 98
• 作者: Ryosuke Nakamura;Haruyo Okunuki;Seiichi Ishida;Shogo Ozawa;Yoshiro Saito;Reiko Teshima;Jun-ichi Sawada
• 通讯作者: Jun-ichi Sawada

Development of Allergen Database for Food Safety (ADFS) : an integrated database to search allergens and predict allergenicity.

食品安全过敏原数据库（ADFS）的开发：一个用于搜索过敏原和预测过敏性的综合数据库。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bulletin of National Institute of Health Sciences 123
• 作者: Ryosuke Nakamura;Reiko Teshima;Kayoko Takagi;Jun-ichi Sawada
• 通讯作者: Jun-ichi Sawada

The hyperresponsiveness of W/W(v) mice to oral sensitization is associated with a decrease in TCRγδ-T cells.

W/W(v) 小鼠对口服致敏的高反应性与 TCRγδ-T 细胞的减少有关。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biological & Pharmaceutical Bulletin 28
• 作者: Haruyo Okunuki;Reiko Teshima;Yuji Sato;Ryosuke Nakamura;Hiroshi Akiyama;Tamio Maitani;Jun-ichi Sawada
• 通讯作者: Jun-ichi Sawada