始原生殖細胞がembryonal carcinoma細胞へと転換する分子機構

原始生殖细胞转化为胚胎癌细胞的分子机制

• 批准号: 22K06040
• 负责人: 鈴木 敦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yokohama National University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06040/
• 关键词: 始原生殖細胞; 精巣テラトーマ; 腫瘍幹細胞; 生殖細胞; 腫瘍; テラトーマ

2022年度においては、EC細胞の新規マーカーとして同定したCAR4を指標として、CAR4陽性細胞をセルソーターによって回収したのちに、naive ES細胞培地である2i/LIFとprimed EpiLC培地であるAF培地で培養し、コロニーの数を比較した。その結果、AF培地で培養した方が、2i/LIF培地で培養した場合より優位にコロニー数が多く、CAR4陽性のEC細胞はprime型の多能性細胞であることが示唆された。一方で、CAR4の発現を誘導する転写因子を探索するために、CAR4を発現する前の細胞集団を同定することを試みた。そのために、single cell RNA-seqのデータを用いてvelocity解析を行ったところ、CAR4陽性細胞集団へと分化が向かう細胞集団を見出すことができなかった。そこで、single cell ATAC-seqにより、クロマチン状態の解析を行うと、始原生殖細胞からCAR4陽性のEC細胞への遷移状態にある細胞集団を特定することができた。これの意味するところは、EC細胞への転換に際して、クロマチン状態は徐々に変化するが、トランスクリプトームはある段階に達すると急激に変化するということだと考えられる。そこで、このデータをsingle cell RNA-seqのデータと統合することで、EC細胞への遷移状態の細胞集団において高発現する転写因子を4つ同定することができた。

2022 年，我们将使用使用 CAR4 的细胞分选仪收集 CAR4 阳性细胞，CAR4 被确定为 EC 细胞的新标记，然后将它们培养在 2i/LIF（一种初始 ES 细胞培养基）和 AF 培养基（一种引发的 EpiLC）中比较培养基中的菌落数。结果，在 AF 培养基中培养时的集落数量明显高于在 2i/LIF 培养基中培养时的集落数量，表明 CAR4 阳性 EC 细胞是初等型多能细胞。另一方面，为了寻找诱导CAR4表达的转录因子，我们试图鉴定不表达CAR4的细胞群。为此，当我们使用单细胞RNA-seq数据进行速度分析时，我们无法找到分化为CAR4阳性细胞群的细胞群。因此，通过使用单细胞 ATAC-seq 分析染色质状态，我们能够识别处于从原始生殖细胞到 CAR4 阳性 EC 细胞过渡状态的细胞群。这可能意味着在向EC细胞过渡的过程中，染色质状态逐渐发生变化，但转录组一旦达到某个阶段就会迅速发生变化。通过将此数据与单细胞 RNA-seq 数据整合，我们能够识别出在向 EC 细胞过渡状态的细胞群中高度表达的四种转录因子。

项目成果

DND1-NANOS3相互作用の生理機能の解析

DND1-NANOS3相互作用的生理功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Maho Akui;Atsushi Suzuki
• 通讯作者: Atsushi Suzuki