アワビの生理活性ペプチドを指標とした成長、環境適応と性成熟の高感度診断法の開発

以鲍鱼生物活性肽为指标，开发生长、环境适应和性成熟的高灵敏度诊断方法

• 批准号: 22K05786
• 负责人: 森山 俊介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05786/
• 关键词: エゾアワビ; ニューロペプチドY; 生殖腺刺激ホルモン放出ペプチド; 脳神経節; ヘモリンパ液; 塩酸アセトン抽出; 雌雄; 成長; アワビ; 生理活性ペプチド; 高感度診断法

本研究は、エゾアワビの脳神経節で産生される有用な生理活性ペプチドの免疫測定系を確立し、それらペプチドのヘモリンパ液中の消長に基づいて、本種の成長、環境適応及び性成熟を高感度かつ正確に評価できる診断法を開発することを目的としている。本年度は、脳神経節およびヘモリンパ液に存在する生理活性ペプチド群の網羅解析を質量分析系により分析し、脳神経節からタキキニン、ニューロペプチドY（NPY）、セレブリン、生殖腺刺激ホルモン放出ペプチド（GnRH）およびインスリン関連ペプチドなど16種類のペプチドを検出した。一方、ヘモリンパ液からはNPY、GnRHおよびインスリン関連ペプチドなど11種類のペプチドを検出した。得られた結果に基づいて、脳神経節およびヘモリンパ液を1N塩酸/アセトン抽出、次いで、抽出残渣を80%アセトン抽出し、得られた抽出物を高性能液体クロマトグラフィーで分画し、NPYおよびGnRHの検出法について検討した。その結果、脳神経節の1N塩酸/ アセトン抽出物から合成GnRHの溶出位置と一致し、タコのGnRH抗体に反応するペプチドが、また、80%アセトン抽出物から合成NPYの溶出位置と一致し、アワビNPY抗体と反応するペプチドが検出された。一方、ヘモリンパ液の1N塩酸/アセトン抽出物から合成NPYの溶出位置と一致し、アワビNPY抗体と反応するペプチドが、また、合成GnRHの溶出位置と一致し、タコのGnRH抗体に反応するペプチドが検出された。これらのペプチドは、成長の良いオスとメスから検出されたが、成長の悪い個体からは検出されなかった。一方、食欲調節に関与すると予想されるセレブリン、また、血圧調節に関与するよ予想されるカルディオアクティブペプチドの抽出法および高性能液体クロマトグラフィーによる検出法について検討した。

在本研究中，我们建立了虾夷鲍颅神经节中产生的有用生理活性肽的免疫测定系统，并根据这些肽在血淋巴液中的变化，确定了该物种的生长、环境适应和性成熟。目的是开发一种能够进行准确评估的诊断方法。今年，我们利用质谱系统对颅神经节和血淋巴中存在的生理活性肽群进行了全面分析，检测到了包括相关肽在内的十六种肽。另一方面，在血淋巴中检测到了NPY、GnRH、胰岛素相关肽等11种肽。根据所得结果，用1N盐酸/丙酮提取颅神经节和血淋巴，然后用80%丙酮提取提取残渣，并通过高效液相色谱法对所得提取物进行分级以分离NPY和GnRH。检测方法。结果，来自颅神经节的1N盐酸/丙酮提取物的合成GnRH的洗脱位置对应于与章鱼GnRH抗体反应的肽，检测到与NPY抗体反应的肽。另一方面，从血淋巴的1N盐酸/丙酮提取物中，得到与合成NPY的洗脱位置对应并与鲍鱼NPY抗体反应的肽，以及与合成GnRH的洗脱位置对应并与鲍鱼NPY抗体反应的肽。检测到章鱼 GnRH 抗体。这些肽在生长良好的雄性和雌性中检测到，但在生长不良的个体中未检测到。另一方面，我们研究了预期与食欲调节有关的脑蛋白和预期与血压调节有关的心脏活性肽的提取方法和使用高效液相色谱的检测方法。