胃癌におけるProx1ホメオボックス転写因子とCOUP-TFII核内受容体の役割

Prox1同源盒转录因子和COUP-TFII核受体在胃癌中的作用

基本信息

批准号：
10J01686
负责人：
山崎智子
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J01686/
关键词：
COUP-TFII Prox1 splicing variant Cyp7a1 血管内皮細胞

项目摘要

胃癌におけるProx1とCOUP-TFIIの機能解析のため、OCUM-2MD3、OCUM-2MLN、MKN7、28、45細胞を用いて両者の発現を調べ、MKN28-COUP-TFIIノックダウン株を樹立し、細胞運動能および足場非依存的増殖が亢進することを示した。しかしこの細胞株をヌードマウスに移植しても腫瘍増殖に有意な差は生じなかった。このCOUP-TFIIの機能の違いが実験系によるものなのか、それとも別の原因によるものなのかを考察し、COUP-TFIIはデータベース上にsplicing variantが報告されており、full lengthをCOUP-TFIIとすると、variantについては未解明であることがわかった。そこでvariantの機能とその作用機序を検討した。まずvariantが各種細胞で発現し、構造上DNA結合を欠いているため、DNA結合能がないことを明らかにした。またCOUP-TFIIはホモダイマーを形成することが知られているが、variantはCOUP・TFIIとヘテロダイマーを形成しCOUP-TFIIのDNA結合を抑制することを示した。さらにCOUP・TFIIおよびvariantの欠損変異体を作製することで、両者の結合部位を明らかにし、内因性の結合も示した。COUP-TFIIはHepG2細胞においてCyp7a1遺伝子の転写を活性化すること報告されているが、variantはこのCOUP-TFIIによるCyp7a1の転写活性化を抑制することを示した。また、variantはCOUP-TFI-がCyp7a1プロモーターに結合することを阻害し、variantの発現により細胞内での内因性のCyp7a1遺伝子の発現も低下することを示した。以上の結果から、variantはCOUP-TFIIとの結合を介してCOUP-TFIIの作用に抑制的に機能している可能性が示唆された。

为了分析 Prox1 和 COUP-TFII 在胃癌中的功能，我们使用 OCUM-2MD3、OCUM-2MLN、MKN7、28 和 45 细胞研究了它们的表达，建立了 MKN28-COUP-TFII 敲低系，并研究了细胞运动性。结果表明，活性和非贴壁依赖性增殖得到增强。然而，当将该细胞系移植到裸鼠体内时，肿瘤生长没有显着差异。我们考虑COUP-TFII的这种功能差异是由于实验系统还是其他原因，发现数据库中已经报道了COUP-TFII的剪接变体，并且COUP-TFII的全长与该变体不同。结果发现，该变种尚未被理解。因此，我们研究了该变体的功能及其作用机制。首先，我们发现该变体在多种细胞中表达，并且不具有DNA结合能力，因为它在结构上缺乏DNA结合。此外，已知 COUP-TFII 形成同二聚体，但该变体显示出与 COUP/TFII 形成异二聚体并抑制 COUP-TFII 的 DNA 结合。此外，通过创建COUP/TFII的缺失突变体和变体，我们阐明了两者的结合位点，并证明了内源性结合。据报道，COUP-TFII 可激活 HepG2 细胞中 Cyp7a1 基因的转录，我们发现一种变体通过这种 COUP-TFII 抑制了 Cyp7a1 的转录激活。我们还表明，该变体抑制了 COUP-TFI- 与 Cyp7a1 启动子的结合，并且该变体的表达还降低了细胞中内源 Cyp7a1 基因的表达。上述结果表明，该变体可能通过与COUP-TFII结合而起到抑制COUP-TFII作用的作用。