小細胞肺癌におけるProx1によるNotch pathwayの制御機構、治療開発

Prox1对小细胞肺癌Notch通路的调控机制及治疗进展

• 批准号: 21K08195
• 负责人: 榊原 純
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08195/
• 关键词: 小細胞肺癌; Prox1; 治療標的

小細胞肺がん細胞株のProx1の発現を確認したところMS-1、H1688，H592，H209,H82,H69でProx1の発現を認めSBC3,SBC5で発現が陰性であった。このためProx1高発現の細胞株であるMS-1を実験に使用しProx1 siRNAでProx1を抑制したところMTT assay、clonogenic assayで細胞増殖がコントロールと比較して増加した。また浸潤能、遊走能をtranswell chabmer法を用いて確認したところProx1 siRNAで増強していた。次にSBC3, SBC5を使用しProx1を強制発現させたところコントロールと比較して細胞増殖能の低下と浸潤能、遊走能の低下を認めた。次にProx1を抑制した場合の関連する分子の蛋白発現をwestern法にて確認したところNotch1-4,下流遺伝子であるHES1, HEY1を含むNotch関連蛋白の発現は予想と反して特に変化を認めなかった。またProx1を強制発現した細胞株においても同様の結果でとなりNotch pathwayとの関連性を認めなかった。neuroblastoma cellsにおいてProx1はp-27 kip1とCdc25Aを直接転写制御しcell cycleや、細胞増に影響を及ぼすことが報告されており（Foskolou IP, et al. Oncogene, 2013）p-27 kip1の蛋白発現とmRANの発現をwesternとRT-PCRにて確認した。MS-1細胞株においてProx1 siRNAによるProx1の抑制はp-27 kip1の発現の低下を認めた。又SBC3, SBC5 のProx1の強制発現細胞株においてはp27の発現が増強していた。さらにcell cycleを確認したところProx1の強制発現細胞株でG1 cell cylce arrestを認めた。

当证实Prox1在小细胞肺癌细胞系中表达时，在MS-1、H1688、H592、H209、H82和H69中观察到Prox1表达，在SBC3和SBC5中发现阴性表达。因此，当我们使用高表达Prox1的细胞系MS-1并用Prox1 siRNA抑制Prox1时，在MTT测定和克隆形成测定中，与对照相比，细胞增殖增加。此外，当使用transwell chabmer方法确认侵袭能力和迁移能力时，发现Prox1 siRNA增强了它们的侵袭能力和迁移能力。接下来，当我们使用 SBC3 和 SBC5 强制表达 Prox1 时，我们观察到与对照相比，细胞增殖、侵袭和迁移能力下降。接下来，我们使用Western方法确认了当Prox1被抑制时相关分子的蛋白表达，与预期相反，Notch相关蛋白（包括Notch1-4和下游基因HES1和HEY1）的表达没有观察到特殊变化。在强制表达Prox1的细胞系中也得到了类似的结果，表明与Notch途径没有关系。据报道，Prox1 直接转录控制神经母细胞瘤细胞中的 p-27 kip1 和 Cdc25A，影响细胞周期和细胞增殖（Foskolou IP, et al. Oncogene, 2013），并且通过 Western 和 RT-PCR 证实了 mRAN 的表达。在 MS-1 细胞系中，Prox1 siRNA 抑制 Prox1 会降低 p-27 kip1 的表达。此外，在被迫表达 Prox1 的 SBC3 和 SBC5 细胞系中，p27 表达增强。此外，当我们确认细胞周期时，我们在强制表达 Prox1 的细胞系中观察到 G1 细胞周期停滞。