悪性腫瘍特異的なRNA選択的スプライシングを制御する抗がん剤の開発

开发控制恶性肿瘤特异性RNA选择性剪接的抗癌药物

基本信息

批准号：
21200074
负责人：
野島孝之
金额：
$ 13.4万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research a proposed research project)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

悪性腫瘍による死亡は増加し続け、2030年には世界で1140万人が悪性腫瘍で死亡すると予測されている。そのため、悪性腫瘍の画期的な治療法の確立は最優先で行われるべき研究のひとつであると考えられる。以前、申請者を含めたグループはRNAスプライシングを標的した抗がん剤候補化合物を報告しており(Nature Chem.Biol., 2007)、スプライシング制御は悪性腫瘍治療の新しいターゲットに成り得ると期待されている。申請者はRNA選択的スプライシング制御により、がん細胞特異的なスプライシングバリアントの生成を抑制することで、がん細胞の種類を問わず効果を発揮する、副作用の少ない画期的な抗がん剤の開発を目指している。最近、解糖系律速酵素のひとつであるピルビン酸キナーゼ(pyruvate kinase type-muscle : PKM)遺伝子の発現制御ががん細胞の増殖に密接に関係していることが報告されたことから、申請者はPKM遺伝子のスプライシングに注目し、研究を遂行してきた。PKM遺伝子はPKM1タンパク質とPKM2タンパク質という2つのアイソフォームを選択的スプライシングによって産生する。正常組織ではエクソン9を含むPKM1、ほとんど全てのがん組織ではエクソン10を含むPKM2が選択されるようになる。申請者は、それぞれのエクソンを選択した際に異なる蛍光タンパク質を発現するレポーターの構築に成功した。このPKMレポーターは、エクソン9を選択する時には緑色蛍光タンパク質GFPを、エクソン10を選択するときには赤色蛍光タンパク質RFPを発現するように設計されている。現在、このレポーターを安定的に発現するマウス筋芽細胞C2C12を樹立している。このPKMレポーター細胞と化合物ライブラリー(購入したFDA認可化合物ライブラリー約700種または東京医科歯科大学の低分子化合物ライブラリー約20,000種)を用いてスクリーニングを始める準備をしているところであり、GFP(正常細胞型)を発現させる化合物の取得を試みている。

恶性肿瘤死亡人数持续增加，预计到2030年全球将有1140万人死于恶性肿瘤。因此，建立恶性肿瘤的创新治疗方法被认为是应该开展的研究重点之一。包括申请人在内的一个小组此前报道了一种针对RNA剪接的候选抗癌药物(Nature Chem.Biol.,2007)，剪接控制有望成为治疗恶性肿瘤的新靶点。申请人的目标是通过RNA选择性剪接控制抑制癌细胞特异性剪接变体的产生，开发一种副作用很少的创新抗癌药物，无论癌细胞类型如何都有效。近年来，有研究报道，糖酵解限速酶之一的丙酮酸激酶型肌肉（PKM）基因的表达调控与癌细胞的增殖密切相关。 PKM 基因的剪接。 PKM 基因通过选择性剪接产生两种同工型：PKM1 蛋白和 PKM2 蛋白。包含外显子 9 的 PKM1 在正常组织中被选择，而包含外显子 10 的 PKM2 在几乎所有癌症组织中都被选择。申请人成功构建了当选择每个外显子时表达不同荧光蛋白的报告基因。该 PKM 报告基因设计用于在选择外显子 9 时表达绿色荧光蛋白 GFP，在选择外显子 10 时表达红色荧光蛋白 RFP。目前，我们已经建立了稳定表达该报告基因的小鼠成肌细胞C2C12。我们正准备使用该 PKM 报告细胞和化合物库（购买的 FDA 批准的约 700 种化合物库或东京医科齿科大学的约 20,000 种低分子化合物库）开始筛选我们正在尝试获得化合物。表达正常细胞类型）。