成熟期エナメル芽細胞に特異的に発現するRunx2の機能解析

Runx2在成熟成釉细胞中特异性表达的功能分析

基本信息

批准号：
20659285
负责人：
豊澤悟
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659285/
关键词：
成熟期エナメル芽細胞 Runx2 アイソフォームエナメル芽細胞

项目摘要

Runx2は、未分化間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化を決定する転写因子として同定され、硬組織を形成する間葉系細胞の骨芽細胞や軟骨細胞などに発現している。我々は、上皮系細胞であるエナメル芽細胞の分化過程の中で、成熟期エナメル芽細胞に特異的にRunx2が発現することを見出した。この成熟期に特異的なRunx2の機能は、成熟期エナメル芽細胞が電解質輸送型・吸収型細胞の特徴を示すことから、これまで知られているRunx2機能とは異なると考えられ、Runx2のアイソフォームの違いにより、異なる機能が存在すると考えられた。本研究では成熟期エナメル芽細胞に特異的に発現するRunx2アイソフォームの同定を試みた。ラット切歯から、レーザーマイクロダイセクション法により、成熟期エナメル芽細胞を選択的に採取し、RNA抽出後、cDNAを作製した。マウスRunx2アイソフォームには、typeI,II,IIIが存在するが、typeIIとIIIは開始部位が異なるだけで、5'非翻訳領域配列が同じであるため、typeIIとIIIの区別はつかないことが分かり、typeIとtypeII/IIIの発現を検討した。その結果、Runx2 typeIの発現は明らかではなく、Runx2 typeII/IIIが発現していることが分かった。さらに、Runx2 typeII/IIIのエクソン4を欠損した選択的スプライシングフォームがシークエンスにより同定された。

Runx2被鉴定为决定未分化间充质干细胞向成骨细胞分化的转录因子，并在形成硬组织的间充质细胞（例如成骨细胞和软骨细胞）中表达。我们发现，在成釉细胞（上皮细胞）的分化过程中，Runx2 在成熟成釉细胞中特异性表达。这种成熟特异性的 Runx2 功能被认为与之前已知的 Runx2 功能不同，因为成熟的成釉细胞表现出电解质转运/吸收细胞的特征，人们认为根据形式存在不同的功能。在这项研究中，我们试图鉴定在成熟成釉细胞中特异性表达的 Runx2 亚型。通过激光显微切割从大鼠门牙中选择性收集成熟成釉细胞，提取RNA后生成cDNA。小鼠Runx2亚型包括I型、II型和III型，但II型和III型仅在起始位点上有所不同，并且具有相同的5'非翻译区序列，因此很难区分II型和III型。 I型和II/III型的表达。结果发现，Runx2 I型没有明确表达，但Runx2 II/III型表达。此外，通过测序鉴定出一种缺少Runx2 II/III型外显子4的替代剪接形式。