胎生期ラットにおける前駆破骨細胞の分化に関する研究

胚胎大鼠前体破骨细胞分化的研究

基本信息

批准号：
05857199
负责人：
豊澤悟
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高度に分化した多核巨細胞である破骨細胞の起源は造血幹細胞、中でも単球-マクロファージ系の前駆細胞に由来すると考えられている。しかし、その分化過程は明かではなく、その前駆細胞は単核細胞であるため、形態学的に同程することが非常に困難である。そこで、前駆破骨細胞のマーカーとして酒石酸耐性酸性ホスファターゼ(TRAP)、炭酸脱水酵素アイソザイムII(CAII)を用いて、胎生期ラットの造血の場(卵黄嚢→肝→脾)と骨原基において、前駆破骨細胞を同定すると共に、これらの酵素が分化のいつの段階(どの造血の場)に発現するかを検討した。なお、単球・マクロファージ・破骨細胞系の共通のマーカーとしてモノクローナル抗体(ED1)がより特異的であることがわかり、個体発生と共に分化する破骨細胞のマーカーとして用いた。また、ラットの炭酸脱水酵素アイソザイムII(CAII)は平成5年度科研費にて得られたモノクローナル抗体にて免疫組織化学的に、TRAPは酵素組織化学的に染色し、上記三種のマーカーで三重染色を行った。その結果、15日目の肝臓にEDI陽性細胞を認めたが、CAIIとTRAPは陰性であった。15日目の骨原器では、軟骨支柱(cartilage core)の周囲の軟骨膜(perichondrium)に血管侵入が見られるが、ED1、CAII、TRAP陽性細胞は見られなかった。16日目の肝臓ではED1陽性細胞がさらに増加したが、これらED1陽性細胞はCAIIとTRAPには陰性を示した。16日目の骨原器には、軟骨膜(perichondrium)の血管周囲にEDI、CAII、TRAP陽性単核細胞が出現し、17日目ではその数の増加が見られた。さらに骨原器内の骨様構造物に接して多核のED1、CAII、TRAP陽性細胞が認められ、これらは破骨細胞であると考えられた。なお、胎生期ラットの造血は脾臓でも行われるが、今回は未検索である。以上から、単球から前駆破骨細胞への分化は、脾臓を除くと、おそらく軟骨膜(perichondrium)内で起こると考えられるがさらに検討中である。

破骨细胞是高度分化的多核巨细胞，被认为起源于造血干细胞，特别是单核巨噬细胞祖细胞。但其分化过程尚不清楚，且其祖细胞为单核细胞，因此在形态学上进行比较极为困难。因此，我们除了鉴定前体破骨细胞外，还使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和碳酸酐酶同工酶II（CAII）作为胚胎大鼠造血场（卵黄囊→肝脏→脾）和骨原基中前体破骨细胞的标记物。，我们研究了这些酶在分化的哪个阶段（在哪个造血区域）表达。此外，单克隆抗体（ED1）被发现作为单核细胞、巨噬细胞和破骨细胞的常见标记物更具特异性，并被用作在个体发育过程中分化的破骨细胞的标记物。另外，用1993年科学研究资助获得的单克隆抗体对大鼠碳酸酐酶同工酶II（CAII）进行免疫组织化学染色，用酶组织化学对TRAP进行染色，并用上面列出的三个标记物进行三重染色。。结果，第15天在肝脏中发现了EDI阳性细胞，但CAII和TRAP呈阴性。在15天的成骨标本中，在软骨核心周围的软骨膜中观察到血管侵袭，但没有观察到ED1、CAII或TRAP阳性细胞。第16天的肝脏中，ED1阳性细胞进一步增加，但这些ED1阳性细胞的CAII和TRAP呈阴性。第16天，成骨组织软骨膜血管周围出现EDI、CAII和TRAP阳性单核细胞，第17天观察到其数量增加。此外，在成骨器官内观察到多核ED1、CAII和TRAP阳性细胞与骨样结构接触，这些细胞被认为是破骨细胞。另外，胚胎大鼠的造血作用也发生在脾脏中，但本次没有检索到。由上可知，单核细胞向前体破骨细胞的分化可能发生在除脾脏之外的软骨膜内，但这仍在进一步研究中。