力学的刺激に応答して生じる骨組織内ATPシグナルのその場観察

骨组织响应机械刺激产生的 ATP 信号的原位观察

基本信息

批准号：
20500388
负责人：
松本裕子
金额：
$ 2.33万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20500388/
关键词：
メカニカルストレス骨組織 ATP バイオルミネッセンス法リモデリング

项目摘要

1 骨における力学的刺激応答性シグナル発現の観察(1)力学的刺激条件の確立これまで力学的刺激応答性骨形成が生じることを確認した3点曲げ荷重負荷に加え,観察部位に直接荷重せずに骨形成反応を生じさせることの出来るマウス脛骨/腓骨軸圧縮負荷の実験システムをあらたに確立した.(2)力学的刺激応答性シグナルの観察上記実験システムを用いて荷重負荷を行った骨を組織学的に観察した.力学的刺激によって骨芽細胞の構造タンパクであるアクチン重合の変化が認められ,ATPシグナルの関与が間接的に裏付けられた.また,Ex vivoの脛骨組織に荷重を負荷し,カルシウム蛍光指示薬を用いた骨組織のカルシウム放出現象を捉えることを試みた.骨膜において荷重負荷に応答してカルシウムシグナルが認められたが,この点についてはATPシグナルとの関連を含め,更に研究中である.2 生体内ATPシグナル検出装置の設計と作製ATP依存的ルシフェリン/ルシフェラーゼ反応により生成される560nmの発光を微弱発光係数装置の閉鎖チャンバー内で検出するシステムをin vitroで立ち上げた. ATP定量プログラムの精確性を向上させるため,ATP濃度と発光量の関係性についてさらにデータを収集中である.

1骨中机械刺激响应信号表达的观察 (1) 机械刺激条件的建立除施加已证实可引起机械刺激响应骨形成的三点弯曲载荷外，不向骨施加直接载荷。我们开发了一种用于小鼠胫骨/腓骨轴压缩负载的实验系统，该系统可以诱导成骨反应。 (2)响应于机械刺激的信号的观察我们使用上述实验系统对承受重量负载的骨骼进行了组织学观察。肌动蛋白是成骨细胞的结构蛋白，通过机械刺激而聚合，观察到Ex的变化，间接支持了参与。 ATP 信号。我们在体内对胫骨组织施加负载，并尝试使用钙荧光指示剂捕获骨组织中的钙释放现象。在骨膜中观察到响应负载的钙信号，但在这方面，ATP 进一步研究正在进行中，包括与信号的关系。2体内 ATP 信号检测装置的设计和构建我们推出了一种体外系统，可在弱发光系数装置的密闭室中检测 ATP 依赖性荧光素/荧光素酶反应产生的 560 nm 发光。为了提高性能，我们目前正在收集有关 ATP 浓度和发光之间关系的进一步数据。