魚類におけるエフェクターＴｈ細胞の免疫制御について

鱼类效应Th细胞的免疫调节

• 批准号: 14J11364
• 负责人: 長峯 隆介
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J11364/
• 关键词: 比較免疫学; ヘルパーT細胞; サイトカイン; 免疫賦活剤

本年度はTh細胞の分化に関与すると考えられるトラフグ組換えサイトカイン(rIFN -γ、rIFN-γ rel、rIL-4/13A、rIL-4/13B、rIL-6、rIL-17A/F-1、rIL-17A/F-2およびrIL-17A/F-3)を作製し、トラフグに摂取することでサイトカインによる免疫賦活効果を検討した。各サイトカイン遺伝子のシグナルペプチド以降をPCRで増幅し、タンパク質発現ベクター（pCold-His）に組み込んだ。その後、大腸菌の形質転換を行い、培養温度の調節によってヒスチジンとの融合タンパク質の発現を誘導した。続いて、合成タンパク質をNi-NTAカラムにて精製し、さらにポリミキシンBを用いてエンドトキシンの除去を行った。精製した各組換えサイトカインを魚体重10gのトラフグ背部筋肉へ5 μg（/100 μl PBS）接種した。コントロールには、PBS 100 μlを同部位に接種した。接種後1，3および5日目にトラフグより頭腎を摘出し、リゾチーム活性、活性酸素産生能および貪食活性の測定を行い、サイトカイン接種による免疫賦活効果を調べた。リゾチーム活性の測定により、rIFN-γ、rIL-4/13A、rIL-4/13BおよびrIL-17A/F-3を接種した区においてコントロール区と比較して有意な増強が確認された。また、活性酸素産生能の測定では、rIFN-γ、rIFN-γ rel、rIL-4/13A、rIL-6、rIL-17A/F-2およびrIL-17A/F-3を接種後1日目において、コントロール区と比較して有意な増強が認められた。さらに貪食活性の測定では、rIFN-γ、rIFN-γ relおよびrIL-4/13Aを接種した区においてコントロール区と比較して有意な活性化が見られた。以上の結果から、組換サイトカインの摂取によりトラフグに免疫賦活効果が確認された。

今年，我们准备了重组鳟鱼puffer鱼细胞因子（RIFN-γ，RIFN-γREL，RIL-4/13A，RIL-4/13B，RIL-4/13B，RIL-6，RIL-17A/F-1，RIL-17A/F-1，RIL-17A/F-2和RIL-17A/F-3），这些因素与细胞的差异有关，这些细胞与cy的效果相差，这些疾病的效果是在细胞中的分化，并且在鳟鱼pufferfish中。通过PCR扩增每个细胞因子基因的信号肽和随后的细胞因子基因，并掺入蛋白质表达载体（PCOLD-HIS）中。随后，将大肠杆菌转化，并通过控制培养温度来诱导融合蛋白与组氨酸的表达。随后，在Ni-NTA柱上纯化了合成蛋白，并使用多氧化物B进行了内毒素。在5μg（/100μlPBS）中，将每种纯化的重组细胞因子接种到背孔中，将其重量为10 g鱼。对照在同一部位接种100μLPBS。接种后的1，第三和第5天，从金枪鱼粉鱼中移除头肾脏，并测量了溶菌酶活性，活性氧产生能力，并测量了吞噬性活性，并检查了细胞因子接种的免疫量化作用。与对照组相比，溶菌酶活性的测量结果证实，RIFN-γ，RIFN-4/13A，RIL-4/13B和RIL-4/13B和RIL-4/13B和RIL-4/13B和RIL-17A/F-3的接种量显着增加。此外，在测量产生活性氧的能力时，在接种后的第一天观察到RIFN-γ，RIFN-γREL，RIL-4/13A，RIL-4/17A/F-2和RIL-17A/F-2和RIL-17A/F-2和RIL-17A/F-2和RIL-17A/F-2和RIL-17A/F-3和RIL-17A/F-3。此外，测量了吞噬活性，与对照切片相比，在接种RIFN-γ，RIFN-γRER和RIFN-γRER和RIL-4/13A的区域中观察到了显着增加的激活。从以上结果来看，通过摄入重组细胞因子来证实金枪鱼河豚的免疫刺激作用。

项目成果

Immunostimulant effects of recombinant cytokine administration in the Japanese pufferfish, Takifugu rubripes

重组细胞因子施用对日本河豚、红鳍东方鲀的免疫刺激作用

• 发表时间: 2014
• 作者: Ryusuke Nagamine;Gouranga Biswas;Jun-ichi Hikima;Masahiro Sakai;Tomoya Kono
• 通讯作者: Tomoya Kono