炎症性腸疾患の病態に関わるCDX2を介した粘膜免疫防御機構の解明とその治療応用

阐明CDX2介导的炎症性肠病病理学粘膜免疫防御机制及其治疗应用

基本信息

批准号：
16H06225
负责人：
中谷真子
金额：
$ 16.22万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、in vitroの実験において、腸上皮細胞株に細菌（shigella flexneri）を感染させたところ、CDX2は腸上皮細胞内に侵入した細菌の増殖を顕著に抑制することを明らかにしている。本年度は、CDX2遺伝子改変マウスを用いて、マウス腸管に感染する病原性大腸菌による感染実験を行った。細菌感染には、Citrobacter rodentium、EHEC EDL933、EHEC 86-24を用いて経口感染させた。しかしながら、SPF環境下で飼育したマウスでは腸内細菌叢により、感染させた細菌が排除されて感染効率が低かったため、抗生物質（ampicillin、kanamycin）を自由飲水させ、常在細菌の排除を行った。3日間の抗生物質による前処理後、C. rodentium、EHEC EDL933を経口感染させ、感染後も抗生物質を自由飲水させ、糞便中の細菌数を数えた。その結果、CDX2遺伝子改変マウスにおける糞便中の細菌数は野生型に比べ多く、腸管での細菌の増殖、および排除にCDX2が関与している事がin vivoにおいて明らかとなった。また、腸上皮細胞株の細胞質において、内因性のCDX2とATG7が結合することを明らかにしている。そこで、GST-CDX2のdeletion mutantを作製し、GST pull downによってATG7との結合部位の同定を試みた。Full lengthのGST-CDX2とATG7との結合は確認する事が出来たが、結合部位の同定については検討中である。

迄今为止，体外实验表明，当肠上皮细胞系被细菌（福氏志贺氏菌）感染时，CDX2显着抑制已侵入肠上皮细胞的细菌的增殖。今年，我们使用CDX2基因修饰的小鼠进行了致病性大肠杆菌感染小鼠肠道的感染实验。对于细菌感染，口腔感染使用啮齿类柠檬酸杆菌、EHEC EDL933和EHEC 86-24。然而，在SPF环境中饲养的小鼠中，感染细菌被肠道菌群消除，导致感染效率低；因此，随意向水中添加抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素）以消除常驻细菌。抗生素预处理3天后，给小鼠口服感染C. rodentium、EHEC EDL933，感染后仍给予抗生素自由饮用，并计数粪便中细菌数。结果，CDX2基因修饰小鼠粪便中的细菌数量高于野生型，表明CDX2参与了体内肠道细菌的增殖和消除。我们还发现内源性 CDX2 和 ATG7 结合在肠上皮细胞系的细胞质中。因此，我们创建了 GST-CDX2 的缺失突变体，并尝试通过 GST pull down 来鉴定与 ATG7 的结合位点。虽然我们能够确认全长 GST-CDX2 和 ATG7 之间的结合，但我们目前正在研究结合位点的识别。