サイトカインによる魚類ヘルパーT細胞の分化誘導機構について

细胞因子诱导鱼类辅助T细胞分化的机制

基本信息

批准号：
12J10303
负责人：
是永大樹
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

1. トラフグCD4^+T (Th)細胞の分化制御機構の検討最終年度ではTh細胞の分化機構のさらなる解明を目的とし、細胞内サイトカイン染色法を用いた研究を行った。細胞内サイトカイン染色とは細胞を抗原もしくはマイトジェンとともに培養することで、活性化されたサイトカインを産生する細胞をタンパク質・細胞レベル検出する測定系である。まず、トラフグの組換えIFN-γおよびIL-4/13Aを大腸菌タンパク質合成系で作製し、CD4^+T細胞に作用させたところ、哺乳類と同様にTh1およびTh2サイトカインの産生がそれぞれ増加することがフローサイトメトリー解析から明らかになった。これらの結果は、魚類においても特異的なサイトカインを産生するCD4^+T細胞が存在し、さらにサイトカインによる分化制御機構を有していることが示唆された。2. トラフグ単球細胞のサイトカイン発現動態に関する研究ヘルパーT細胞は、抗原提示細胞(APC)から抗原刺激を受け、APCおよびTh細胞自身から産生されるサイトカインによって活性化する。そのため、Th細胞の分化制御において抗原提示細胞の働きは重要である。そこで、抗原提示能を持つ単球の活性化や分化の制御機構をサイトカイン遺伝子の発現動態から検討した。まず、トラフグの末梢血より単球を分離し、形態観察、フローサイトメトリー(FCM)解析および細胞マーカーの発現解析を行った。分離された単球に対し免疫誘導物質(LPS、polyI : C、IMQ)で刺激した結果、新たな細胞集団がFCM解析によって検出された。この細胞集団は、刺激前の単球集団と比べ高い貧食活性を示した。さらに、単球の活性化に重要なCSF-1bだけでなく、Th細胞の分化誘導に深く関係するIFN-γなどのサイトカイン遺伝子の発現増加が認められた。

1。在最后一年中检查金枪鱼pufferfish CD4^+t（th）细胞的分化机理，我们使用细胞内细胞因子染色进行了研究，目的是进一步阐明TH细胞分化的机制。细胞内细胞因子染色是一种测量系统，其中将细胞与抗原或有丝分裂剂一起培养，以检测产生活化细胞因子的细胞的蛋白质和细胞水平。首先，使用大肠杆菌蛋白合成系统制备了金枪鱼粉的重组IFN-γ和IL-4/13A，并作用于CD4^+T细胞，流式细胞仪分析表明，TH1和Th2细胞因子的产生增加了，与哺乳动物相似。这些结果表明，鱼类也存在产生特定细胞因子的CD4^+T细胞，并且它们也具有控制细胞因子分化的机制。 2。研究金枪鱼粉的单核细胞中细胞因子表达的动力学辅助细胞T细胞被抗原呈现的细胞（APC）抗原刺激，并被APC和TH细胞本身产生的细胞因子激活。因此，抗原呈现细胞的功能对于控制TH细胞分化很重要。因此，我们研究了基于细胞因子基因的表达动力学来控制单核细胞激活和分化单核细胞的机制。首先，从金枪鱼的外周血中分离单核细胞，进行形态学观察，流式细胞仪（FCM）分析，并进行了细胞标记表达分析。用免疫诱导剂（LPS，Polyi：C，IMQ）刺激分离的单核细胞导致通过FCM分析检测新细胞群。该细胞群显示出比预刺剂单核细胞种群更高的触诊活性。此外，增加的细胞因子基因（例如IFN-γ）的表达不仅对单核细胞激活很重要，而且对于诱导TH细胞的分化也很重要。