ヒト組織感染モデルによるヒト免疫不全ウイルス間の相互作用からみた病態の解析

使用人体组织感染模型分析人类免疫缺陷病毒之间相互作用的病理状况

基本信息

批准号：
16790281
负责人：
伊藤嘉規
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.HIV-1感染症を引き起こすウイルスのサブタイプである、R5指向性HIV-1(R5 HIV-1)、X4指向性HIV-1(X4 HIV-1)およびR5X4両指向性HIV-1(R5X4 HIV-1)の3種の相互作用を検討するためのモデルについて検討した。医学的理由で摘出された健常扁桃組織を小片に切り分けて作成したヒトリンパ組織モデルにおいて、それぞれのプロトタイプとして、増殖曲線が同様で、均一なウイルスストックが得られやすいものとして、SF162(R5 HIV-1)、LAV.04(X4 HIV-1)および89.6(R5X4 HIV-1)を選択した。さらに、これらの組み合わせにおいて、それぞれのウイルスを他の2つのウイルス存在下で、正確に定量できるようなプライマーの設定を試みた。gp120遺伝子内の部位に設定したプライマーにより、こうしたことが可能なリアルタイム定量PCRアッセイを確立した。上記3種のウイルスを共感染させた場合は、R5 HIV-1の増殖は抑制され、X4 HIVとRSX4 HIV-1の増殖は競合阻害を示した。2.HIV-1およびHIV-2の相互作用については、SF162(R5 HIV-1)と7924A(HIV-2)の組み合わせ、およびLAV.04(X4 HIV-1)と7924A(HIV-2)の組み合わせにおいて共感染モデルおよびリアルタイム定量PCRアッセイを確立した。この場合のプライマーは、HIV-1についてはvpu遺伝子(HIV-2にはない)領域に設定し、HIV-2についてはvpr遺伝子(HIV-1とHIV-2で相同性が低い)領域に設定した。上記2組の共感染実験の結果、HIV-2はR5 HIV-1に対して、X4 HIV-1はHIV-2に対して増殖を抑制した。この現象を説明できる因子について解析をすすめている。

1.引起HIV-1感染的病毒亚型有R5嗜性HIV-1（R5 HIV-1）、X4嗜性HIV-1（X4 HIV-1）和R5X4兼嗜性HIV-1（我们研究了一种用于检查三种类型 R5X4 HIV-1 相互作用的模型）。在通过将因医疗原因切除的健康扁桃体组织切成小块而创建的人类淋巴组织模型中，选择了SF162（R5 HIV-1）、LAV.04（X4 HIV-1）和89.6（R5X4 HIV-1）。此外，在这些组合中，我们尝试设计引物，以便在其他两种病毒存在的情况下能够准确定量每种病毒。我们建立了一种实时定量 PCR 检测方法，通过使用 gp120 基因内位点上的引物集来实现这一点。当上述三种病毒共同感染时，R5 HIV-1的增殖受到抑制，而X4 HIV和RSX4 HIV-1的增殖则表现出竞争性抑制。 2.对于HIV-1和HIV-2的相互作用，SF162（R5 HIV-1）和7924A（HIV-2）的组合，以及LAV.04（X4 HIV-1）和7924A（HIV-2）的组合。 2)联合感染模型与实时定量PCR检测相结合建立。在这种情况下，HIV-1 的引物设置在 vpu 基因区域（HIV-2 中未发现），而 HIV-2 的引物设置在 vpr 基因区域（HIV-1 和 HIV-2 之间的同源性较低）。。上述两组共感染实验的结果是，HIV-2抑制R5 HIV-1的增殖，X4 HIV-1抑制HIV-2的增殖。我们目前正在分析可以解释这一现象的因素。