活性化肝星細胞におけるinterferon-α,γ標的タンパク質の網羅的解析

活化肝星状细胞中干扰素α、γ靶蛋白的综合分析

基本信息

批准号：
16790211
负责人：
及川浩樹
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790211/
关键词：
肝星細胞線維化 Vitamin A INFγ 細胞骨格細胞増殖プロテオー慢性肝疾患

项目摘要

(目的)肝の線維化は,肝炎・肝硬変などの慢性炎症性肝疾患で最も普遍的にみられる形態変化で,肝星細胞(hepatic stellate cell : HSC)がその主要な役割を担っていると推定されている.当該研究課題では,INF-α/-γの有するHSC形質復元作用に関わる分子機構を明らかにすることを目的として,(1)二次元電気泳動,(2)抗リン酸化アミノ酸特異抗体によるブロッティング,(3)質量分析計を用いたフィンガープリント解析による蛋白質の同定,等の手技を駆使して,INF-α/-γ刺激によって変化する蛋白質およびそのリン酸化状態の変化を網羅的に解析する.(方法)INF-α,-γ投与効果のプロテオーム解析.(1)無処置のWistar系ラット(250g前後)の肝組織より比重遠心法を用いてHSCを分離する.(2)INF-α/-γの添加.(3)二次元電気泳動(4)質量分析.(結果)1)活性化星においてINFγ投与によって変動した蛋白質のスポットはのべ217spotを検出した.2)検出されたSpotは従来言われていた抗線維化マーカー,細胞骨格,細胞増殖関連分子に加えて,Vitamin Aのエステルに関わる長鎖脂肪酸の合成系の亢進が認められた・(方向性)INFγは肝星細胞に対して,本来の機能の一つであるVitamin Aの取り込みを活性化させる可能性が示唆された.本研究ではさらに,長鎖脂肪酸合成系酵素の転写活性,およびretinoid輸送系の関連蛋白質の変動を明らかにしたい.

【目的】肝纤维化是肝炎、肝硬化等慢性炎症性肝病最常见的形态学改变。在本研究项目中，我们旨在阐明INF-α/-γ对HSC性状恢复作用的分子机制（1）二维电泳，（2）抗磷酸化氨基酸特征。通过充分利用不同抗体印迹和（3）使用质谱仪通过指纹分析鉴定蛋白质等技术，我们涵盖了由于INF-α/-γ刺激而改变的蛋白质及其磷酸化状态的变化。方法） ) INF-α,-γ 施用效果的蛋白质组学分析 (1) 使用比重离心从未经治疗的 Wistar 大鼠 (约 250 g) 的肝组织中分离 HSC。 (2) INF-α/-γ (3)。 ) 二维电泳 (4) 质谱分析。 (结果) 1) 总共检测到 217 个蛋白质点，这些点在激活的星体中被 INFγ 施用改变。 2) 检测到的点与抗纤维化标记物、细胞骨架和细胞增殖相关分子相关，这些分子以前被认为与抗纤维化标记物、细胞骨架和细胞增殖相关分子有关。另外，维生素在这项研究中，我们观察到与 A 酯相关的长链脂肪酸合成系统的增强可能会激活维生素 A 的摄取，这是其原始功能之一。进一步阐明长链脂肪酸合成酶的转录活性以及与类视黄醇转运系统相关的蛋白质的变化。