細胞の癌化におけるRas標的蛋白質PLCεの役割

Ras靶蛋白PLCε在细胞癌变中的作用

基本信息

批准号：
16790187
负责人：
枝松裕紀
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

PLCεは、ras遺伝子産物Ras蛋白質とその類縁のRap蛋白質によって制御をうけるホスホリパーゼCである。これまでのPLCεノックアウトマウスを用いた解析により、PLCεの欠損が7,12-ジメチルベンズアントラセン(DMBA)をイニシエーターに、12-O-テトラデカノイルホルボール-12-アセテート(TPA)をプロモーターに用いる皮膚二段階化学発癌実験でパピローマの形成とその悪性進展を阻害すること、ならびにTPA処理が引き起こす皮膚の過形成を抑制することを示してきた。その機構の解析を主に次の二つの方法で行った。1.ノックアウトマウスに生じた腫瘍の解析:TPAが引き起こす皮膚の過形成時に発現誘導される遺伝子を解析し、ヘパリン結合性上皮成長因子(EGF)様成長因子(HB-EGF)など過形成誘導に関わる遺伝子の誘導が、PLCεノックアウトマウスで抑制されていることを見出した。2.ヒト癌細胞株やマウス皮膚初代培養を用いた解析:ヒト大腸癌由来DLD-1細胞やヒト膵臓癌由来Panc-1細胞などのras遺伝子に活性型変異を持つ癌細胞株においてPLCε特異的siRNAを用いてPLCεをノックダウンしたが、それらの細胞の増殖や生存への顕著な影響は認められなかった。また、PLCεノックアウトマウス由来の初代培養ケラチノサイトでのTPA刺激で誘導される遺伝子を解析し、シクロオシシゲナーゼ(COX)-2などの発現誘導が抑制されていることを見出した。これらの遺伝子発現誘導の抑制が、PLCεノックアウトマウスで見られる皮膚過形成の抑制に関わる可能性が示唆された。

PLCε是一种磷脂酶C，受ras基因产物Ras蛋白及其相关Rap蛋白调节。先前使用 PLCε 敲除小鼠的分析表明，PLCε 缺陷是由 7,12-二甲基苯并蒽 (DMBA) 作为引发剂和 12-O-十四烷酰佛波醇-12-乙酸酯 (TPA) 作为两步皮肤化学致癌作用诱导的。实验显示，它可以抑制乳头状瘤的形成及其恶性进展，以及抑制TPA治疗引起的皮肤增生。主要采用以下两种方法对其机理进行分析。 1. 基因敲除小鼠中产生的肿瘤分析：我们分析了TPA诱导皮肤增生期间诱导表达的基因，并鉴定了诱导增生的基因，例如肝素结合表皮生长因子（EGF）样生长因子（HB-EGF））我们发现 PLCε 敲除小鼠中相关基因的诱导受到抑制。 2.使用人类癌细胞系和小鼠皮肤原代培养物进行分析：ras基因激活突变的PLCε特异性癌细胞系，例如人类结肠癌来源的DLD-1细胞和人类胰腺癌来源的Panc-1细胞使用 siRNA 敲除 PLCε，未观察到对这些细胞的增殖或存活有显着影响。我们还分析了来自 PLCε 敲除小鼠的原代培养角质形成细胞中 TPA 刺激诱导的基因，发现环氧化酶 (COX)-2 和其他基因表达的诱导受到抑制。有人认为，抑制这些基因表达的诱导可能与在 PLCε 敲除小鼠中观察到的皮肤增生的抑制有关。