アポトーシス誘導能を指標にした口腔癌の放射線治療感受性判定法の開発

以细胞凋亡诱导能力为指标测定口腔癌放疗敏感性的方法的建立

基本信息

批准号：
14771044
负责人：
森本泰宏
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

アポトーシス系のシグナル伝達機構を調べる中で、オカダ酸により誘導された口腔癌アポトーシス細胞では、鍍銀染色に陽性反応を示す核小体形成帯が消失すること、アポトーシス誘導の際に、鍍銀染色に陽性反応を示す110kDa核内蛋白が消失し、80kDaの鍍銀染色に陽性反応を示す蛋白が出現することを発見した。更に、cell-free systemにおける解析の結果、110kDaの蛋白の変化はアポトーシスの実行機構であるDNA fragmentaionと密接な関係があることも発見した。しかも、ニュークレオリンモノクローナル抗体を用いたWestern blotting法及び免疫組織化学の結果から110kDa及び80kDaの蛋白は両者ともニュークレオリンであることが証明した。しかも、その経過はDNA fragmentationが惹起する時間と極めて連動性を示すものだった。上記したオカダ酸誘発アポトーシス細胞におけるニュークレオリンの分解は、抗癌剤及び紫外線照射によっても惹起されることが確認され、アポトーシス細胞における普遍的変化としてその指標となりうるものである。つまり、ニュークレオリン含む細胞内核内蛋白の変化がアポトーシス実効機構において、極めて重要な役割を示すことを意味するものである。一方、in vivoにおける実験モデルの作成を目的に、ヒト舌癌由来の細胞株(VX2)を兎の下顎歯肉に移植し下顎歯肉癌を惹起させる実験系を作成した。同腫瘍に放射線照射した際、癌組織は縮小しその一部はTUNEL法を用いた組織学的所見からアポトーシスによるものであることが判明した。また、in vitro上で生じたニュークレオリンの分解が、in vivoにおける照射後アポトーシスを誘導が認められた実験モデルから得た組織抽出液からも確認された。以上の結果は更にニュークレオリンの分解がアポトーシス誘導を簡易に表す指標になりうることを意味する。同時に放射性感受性を示す指標となりうる可能性を示唆するものである。更に、僅か6症例ではあるが患者からの口腔癌細胞株を用いた研究から培養株細胞でニュークレオリンの分解が生じやすいものは、放射線感受性が高いという結果も得ている。

在研究细胞凋亡系统的信号转导机制时，我们发现在冈田酸诱导的口腔癌细胞凋亡中，镀银染色呈阳性反应的核仁区消失了，并发现了一个110kDa的核蛋白。染色阳性反应消失，出现80kDa银染阳性反应的蛋白。此外，通过在无细胞系统中的分析结果，我们发现110kDa蛋白的变化与DNA片段化密切相关，而DNA片段化是细胞凋亡的执行机制。此外，使用核仁素单克隆抗体进行的蛋白质印迹和免疫组织化学结果表明，110kDa和80kDa蛋白都是核仁素。此外，该过程的过程与DNA断裂发生的时间高度相关。已经证实，上述大田酸诱导的凋亡细胞中核仁素的分解也是由抗癌药物和紫外线照射引起的，并且可以作为凋亡细胞普遍变化的指标。这意味着包括核仁素在内的细胞内核蛋白的变化在细胞凋亡的有效机制中发挥着极其重要的作用。另一方面，为了创建体内实验模型，我们创建了一个实验系统，其中将源自人舌癌（VX2）的细胞系移植到兔子的下颌牙龈中以诱导下颌牙龈癌。当肿瘤受到放射线照射时，癌组织收缩，使用TUNEL方法的组织学结果表明，部分收缩是由于细胞凋亡所致。此外，在从实验模型获得的组织提取物中也证实了核仁素在体外发生的降解，在该实验模型中观察到体内照射后细胞凋亡被诱导。上述结果进一步表明核仁素降解可以作为细胞凋亡诱导的简单指标。同时，这表明它可以作为放射敏感性的指标。此外，使用来自患者的口腔癌细胞系的研究表明，易受核仁素降解影响的培养细胞对辐射高度敏感，尽管只有六例。