大腸癌拒絶抗原由来ペプチドに対する血中1gG抗体の誘導機構及び抗腫瘍作用の解明

阐明血液1gG抗体对结直肠癌排斥抗原衍生肽的诱导机制和抗肿瘤作用

基本信息

批准号：
14770671
负责人：
小松誠和
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770671/
关键词：
抗ペプチド抗体

项目摘要

本研究においては、対象ペプチドとしてHLAクラスI分子結合性癌拒絶抗原ペプチドSART3-109を用いた。抗体価の測定はペプチドを固相化したELISA法により行った。調べた癌患者において、幾人かの患者ではSART3-109ペプチドに対する抗体価が認められたが、調べた健常人ではSART3-109ペプチドに対する抗体活性は認められなかった。臨床試験においてSART3-109ペプチドワクチンを投与した患者においては、SART3-109特異的抗体価の上昇が認められた。また、マウスにおいて非免疫BALB/cの血清を採取し、抗ペプチド抗体(抗SART3-109抗体)を測定したが、自然抗体が弱いながらも認められた。抗ペプチド抗体(免疫抗体)を得る目的で、BSAあるいはKLH結合ペプチドを準備し、BALB/cマウスに各週免疫し、x63細胞とのハイブリドーマを作製した。得られた目的ハイブリドーマの多くはSART3-109のみならず弱いながらも他のペプチドに対しても広く反応性を示した。ハイブリドーマ培養上清よりプロテインGを用いてIgG画分を精製した。精製IgG分画を培養細胞培地中に添加し増殖に及ぼす作用などを調べた結果、何ら影響が認められなかった。抗ペプチド抗体活性の認められた数名の癌患者血清よりProteinGを用いてIgG画分を精製し、ペプチドを含むタンパク質に対する結合価をウエスタンブロッティング法により確認したが、タンパク質に対する特異的なバンドは認められなかったが、それ以外のいくつかのバンドが認められた。今後検出されたバンドの分子を特定することが、新たな知見を得る鍵となるであろう。

本研究以HLA I类分子结合癌排斥抗原肽SART3-109作为靶肽。使用固定化肽通过ELISA测量抗体滴度。在检查的癌症患者中，在一些患者中观察到针对SART3-109肽的抗体滴度，但在检查的健康受试者中没有观察到针对SART3-109肽的抗体活性。在临床试验中，在接受 SART3-109 肽疫苗的患者中观察到 SART3-109 特异性抗体滴度增加。此外，我们收集了非免疫BALB/c小鼠的血清并测量了抗肽抗体（抗SART3-109抗体），但观察到了天然抗体，尽管很弱。为了获得抗肽抗体（免疫抗体），制备BSA或KLH结合肽，并每周免疫BALB/c小鼠，以与x63细胞产生杂交瘤。获得的许多目标杂交瘤不仅对 SART3-109 表现出广泛的反应性，而且对其他肽也表现出广泛的反应性，尽管反应性较弱。使用蛋白 G 从杂交瘤培养物上清液中纯化 IgG 级分。当将纯化的IgG级分添加到培养的细胞培养基中并研究其对增殖的影响时，没有观察到影响。使用 ProteinG 从几位具有抗肽抗体活性的癌症患者的血清中纯化 IgG 级分，并通过 Western blotting 证实了与含有该肽的蛋白质的结合滴度，但没有观察到该蛋白质的特异性条带，但也观察到了其他几个条带。被认可了。未来，识别检测到的条带的分子将是获得新知识的关键。