マイクロアレイ・プロテオミクス技術を駆使した卵巣癌の予後規定因子の網羅的探索

利用微阵列蛋白质组学技术全面寻找卵巢癌的预后因素

基本信息

批准号：
21659386
负责人：
金山清二
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

【予後推定遺伝子の抽出】我々は予後の判明している卵巣漿液性腺癌組織を用いて、マイクロアレイ解析を実施して悪性度を推定する遺伝子の網羅的解析を実施した結果、12遺伝子の過剰発現あるいはリン酸化が起こることを確認した。これらは癌細胞の増殖、細胞分裂、アポトーシス、浸潤能が促進された結果であることを確認した。さらにこれらの遺伝子を含めてパスウエイ解析およびGene Ontology解析を行った結果、卵巣がんの悪性度を規定する因子として上皮・間葉移行epithelial-mesenchymal transition(EMT)関連遺伝子が最重要因子として抽出された。一方、卵巣明細胞腺癌では悪性を反映する遺伝子プロファイルが漿液性腺癌とは異なっていた。明胞腺癌の予後不良因子として薬剤感受性低下関連遺伝子、解毒遺伝子、細胞周期遺伝子が予後規定因子が同定され、これらの遺伝子発現は酸化ストレスと密接に関連していることが判明した。酸化ストレス過剰の原因か結果かは不明であるが、転写因子hepatocyte nuclear factor (HNF)-1betaが過剰発現しており、この遺伝子下流の70%に解毒遺伝子が存在していた。【HNF-1beta遺伝子ノックダウンによる結果】HNF-1betaをノックダウンすることによりアポトーシスを誘導すること、薬剤感受性が亢進すること、細胞周期停止が解除されることを確認した。【免疫染色法・血清測定法の確立】上記のマイクロアレイおよびプロテオミクス解析により過剰発現しているEMT関連蛋白およびHNF-1betaを免疫組織染色することにより、予後不良漿液性腺癌、明細胞腺癌に特異的に過剰発現していることを確認した。現在、各種因子を血中で測定するために免疫比濁法(ナノセンサー、ネットフォース株式会社製)・ELISAで測定している。

[预测预后的基因扩展]我们对使用卵巢浆液性腺癌组织进行了已知预后的卵巢浆液性腺癌组织进行微阵列分析，以全面分析，并证实了12个基因的过表达或磷酸化。我们确认这些是促进癌细胞增殖，细胞分裂，凋亡和侵入性潜力的结果。此外，进行了途径分析和基因本体分析以包括这些基因，并将上皮 - 间质转变（EMT）相关基因提取为最重要的因素，作为定义卵巢癌恶性肿瘤的因素。另一方面，卵巢癌的透明细胞腺癌具有不同的遗传特征，反映了恶性肿瘤。诸如药物敏感，解毒和细胞周期基因之类的预后因素被鉴定为囊泡腺癌的预后因素不良，并且发现这些基因表达与氧化应激密切相关。目前尚不清楚是否引起过度氧化应激的原因或结果，但是转录因子肝细胞核因子（HNF）-1BETA过表达，并且该基因下游的70％存在排毒基因。 [HNF-1BETA基因敲低的结果]我们证实，HNF-1Beta的敲低会诱导凋亡，增加药物敏感性并释放细胞周期停滞。 [建立免疫染色和血清测量方法]通过过表达EMT相关蛋白和HNF-1BETA的免疫组织化学染色，上述微阵列和蛋白质组学分析证实，它们在浆液性腺瘤瘤和透明的细胞腺癌中专门表达过表达，并具有差的细胞腺癌。当前，使用免疫尿素法（Nanosensor，Netforce Co.，Ltd。）和ELISA在血液中测量各种因素。