体内時計とアレルギー性疾患

生物钟与过敏性疾病

基本信息

批准号：
21659244
负责人：
中尾篤人
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659244/
关键词：
アレルギー・ぜんそく遺伝子体内時計

项目摘要

本年度(平成22年度)は、マスト細胞の脱顆粒反応において概日性のリズムが認められ、そのリズムがマスト細胞のもつ体内時計によって制御されているか否かについて以下の方法によってin vivoの実験系を用いて検討した。1マスト細胞における"時計遺伝子"が欠如したマウスの作成時計遺伝子群において中心的な役割を果しているPer2遺伝子の変異マウスが既に樹立されており、概日リズムの乱れが観察されている(Nature 400,169,1999)。このマウスは研究協力者である柴田重信博士(早稲田大学)から入手した。このマウス骨髄細胞(及びコントロールとして野生型マウス骨髄細胞)をIL-3/SCFの存在下で培養しBMMCを得たあと、マスト細胞欠損マウス(W/Wvマウス)に移入しPer2欠損マスト細胞をもつマウス(マスト細胞に"時計遺伝子"機能がないマウス)ならびに正常マスト細胞をW/Wvマウスに移入したコントロールマウスを樹立した。なおマスト細胞はマウス背部皮下に導入した。2マスト細胞"時計遺伝子"欠如マウスへの急性皮膚過敏反応モデルの導入これらのマウスに、TNP-IgE抗体をマウス背部皮下に注射し、その後、対応抗原であるDNP-BSAとエバンスブルー色素を静脈注射し、急性の皮膚即時型過敏反応(PCA反応)を惹起させた。このとき、ODNP-BSAをチャレンジする時間を、日中及び夜間など時間を変えて行い、チャレンジする時間による皮膚反応の強さの変化について観察した。本実験によって、PCA反応における概日リズムの存在と、この反応におけるマスト細胞に内在する体内時計の役割が明らかになる。現在までPCA反応に概日リズムがあることは確認し、現在更なる実験中である。

今年（2010年度），我们观察了肥大细胞的脱粒反应的昼夜节律，并使用体内实验系统使用以下方法研究了该节律是否受肥大细胞的内部时钟控制。 1 肥大细胞中缺乏“时钟基因”的小鼠的创建已经建立了在时钟基因组中起核心作用的 Per2 基因突变小鼠，并观察到昼夜节律紊乱（Nature 400,169， 1999）。该小鼠是从研究合作者 Shigenobu Shibata 博士（早稻田大学）获得的。这些小鼠骨髓细胞（以及作为对照的野生型小鼠骨髓细胞）在IL-3/SCF存在下培养以获得BMMC，然后转移到肥大细胞缺陷小鼠（W/Wv小鼠）中以产生我们建立了缺乏Per2的肥大细胞的小鼠（肥大细胞不具有“时钟基因”功能的小鼠）和对照小鼠，其中正常肥大细胞被转移到W/Wv小鼠中。将肥大细胞皮下引入小鼠背部。 2 缺乏肥大细胞“时钟基因”的小鼠建立急性皮肤过敏反应模型将TNP-IgE抗体皮下注射到小鼠背部，然后静脉注射相应的抗原DNP-BSA和伊文思蓝染料小鼠注射诱导急性皮肤速发型超敏反应（PCA 反应）。此时，在白天和夜间等不同时间进行ODNP-BSA攻击，观察根据攻击时间的皮肤反应强度的变化。该实验揭示了 PCA 反应中昼夜节律的存在以及肥大细胞内部生物钟在该反应中的作用。迄今为止，我们已经确认PCA反应存在昼夜节律，目前正在进行进一步的实验。