肺腺癌の転移に関わる糖鎖抗原の検討に基づく新たな転移治療に関する基礎的研究

基于肺腺癌转移相关糖链抗原检测的新型转移治疗基础研究

• 批准号: 13770739
• 负责人: 鈴木 弘行
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770739/
• 关键词: PNA; 肺腺癌; 糖タンパク

現在までに、ヒト肺腺癌細胞株と肺腺癌切除症例15例で糖鎖結合タンパク発現の検討を行った。臨床サンプルにおいて、SDS-PAGEおよびpeanut agglutinin(PNA)を用いたlectin blotsを行い、腫瘍組織と正常組織でのPNA認識糖タンパク発現を比較検討したところ、約7割の症例において正常肺組織で分子量約69kDa、200kDaのbandの発現増強を認めた。一方、腫瘍組織での同bandの発現は認めなかった。体液成分の影響は否定され、肺組織由来の糖タンパクの癌化によるdownregulationが示唆される。今後、腫瘍組織を分画し、細胞局在部位を確認すると同時に、このbandの発現の変化が、糖鎖構造の変化によるのかタンパク量の変化によるのかを検討する。また、他の組織型の肺癌あるいは他臓器癌でも正常組織・腫瘍組織で比較し、この糖タンパクが、肺特異的であるか否かも確認する。更に、正常肺組織から全タンパクを抽出し、affinity columnに通して正常組織で発現を認めるPNA認識糖タンパクの精製を試みる。精製後、SDS-PAGEおよびlectin blotsにて同分子であることを確認し、peptide sequenceを解析し、標的糖タンパクのアミノ酸配列をdata baseから同定する。また、対象症例を増やしてこのPNA認識糖タンパクの発現の変化と臨床病理学的因子との関連についても併せて検討していく。本実験系にて、PNA認識タンパクとは別に、腫瘍組織で発現増強しているタンパクをSDS-PAGE後のゲル染色で確認した。ほぼ全例で増強しており、分子量約60kDa。このタンパクは、癌化によるupregulationが考慮され、これについても今後、検討予定である。

迄今为止，我们已经研究了人肺腺癌细胞系和 15 个肺腺癌切除病例中碳水化合物结合蛋白的表达。使用 SDS-PAGE 和使用花生凝集素 (PNA) 的凝集素印迹对临床样品进行比较，观察到约 69kDa 和 200kDa 条带的 PNA 识别糖蛋白的表达增强。另一方面，在肿瘤组织中没有观察到相同条带的表达。排除了体液成分的影响，并表明由于癌化而导致肺组织来源的糖蛋白下调。未来，我们将分割肿瘤组织并确认细胞定位位点，同时检查该条带表达的变化是否是由于糖链结构的变化或蛋白量的变化。此外，我们还将比较肺癌其他组织类型或其他器官癌症的正常组织和肿瘤组织，以确认这种糖蛋白是否具有肺特异性。此外，我们将尝试从正常肺组织中提取所有蛋白质，并将它们通过亲和柱，以纯化正常组织中表达的 PNA 识别糖蛋白。纯化后，使用 SDS-PAGE 和凝集素印迹确认分子相同，分析肽序列，并从数据库中识别目标糖蛋白的氨基酸序列。我们还将增加目标病例的数量，并检查这种PNA识别糖蛋白的表达变化与临床病理因素之间的关系。在该实验系统中，除了PNA识别蛋白外，在SDS-PAGE后通过凝胶染色证实肿瘤组织中表达增强的蛋白。几乎在所有情况下它都会增强，分子量约为 60kDa。这种蛋白质被认为会因癌变而上调，我们计划在未来对此进行研究。