魚類細胞におけるアスタキサンチン誘導性ヒートショック・プロテインの機能

虾青素诱导的鱼细胞热休克蛋白的功能

基本信息

批准号：
13760152
负责人：
中野俊樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ストレスによる細胞障害の評価法について:魚類由来の細胞を使用してin vitroの系でストレスに対するレスポンスを評価する方法を検討した。ニジマス由来の樹立株化細胞2種および平成13年度の本研究によりに培養条件を検討した初代培養肝細胞を用いて検討したところ、in vivoの状況を良く反映しているという点で肝細胞の利用が優れていると思われた。さらに細胞障害の評価法としては、膜障害を表す培養液上清の遊離LDH活性と生細胞数をダイレクトに知ることのできるWST-1法(同仁化学)が再現性および簡便さの点で有効であった。(2)初代培養肝細胞におけるストレスの影響:初代培養肝細胞を用いてヒートショック以外のストレス、すなわち過酸化水素による酸化的ストレスおよびコールドショックがHsp発現におよぼす影響について調べた。過酸化水素によるHspの発現におよぼす影響は不明確であった。これは過酸化水素の添加濃度や培養時間などを検討する必要があると考えられる。一方コールドショックではHsp30の誘導が認められ、低温下の細胞生存における低分子Hspの新たな機能が推察された。なお魚類における低分子Hspの新たな機能について発見・考察したのは本研究が初めてであると思われる。(3)アスタキサンチン(ASX)添加による新規タンパク質の発現:肝細胞をASXと共に培養したものと無添加のそれとを比較した結果、Hsp以外にも出現タンパク質の増減が観察され、新規タンパク質の誘導が電気泳動法により認められた。今後は誘導されるタンパク質の解析を進め、その新規タンパク質とHspおよびストレスとの機能相関について検討する必要があろう。

(1)关于应激引起的细胞损伤的评价方法：我们研究了使用鱼类来源的细胞在体外系统中评价应激反应的方法。该研究使用两种已建立的虹鳟鱼细胞系和原代培养肝细胞进行，其培养条件在2001年进行的这项研究中进行了检查。它似乎非常有用。此外，作为评价细胞损伤的方法，WST-1法(同仁化学株式会社)是有效的，该方法可以直接测定指示膜损伤的培养上清液中的游离LDH活性和活细胞数。就再现性和简单性而言。 (2)应激对原代培养肝细胞的影响：使用原代培养肝细胞，我们研究了热休克以外的应激，即过氧化氢和冷休克引起的氧化应激对Hsp表达的影响。过氧化氢对 Hsp 表达的影响尚不清楚。这可能需要考虑添加的过氧化氢的浓度、培养时间等。另一方面，冷休克诱导了Hsp30，表明低分子量Hsp在细胞低温存活中具有新功能。这项研究似乎是第一个发现并讨论鱼类中低分子量热休克蛋白新功能的研究。 (3)添加虾青素(ASX)引起的新蛋白质的表达：比较添加ASX和未添加虾青素培养的肝细胞的结果，观察到Hsp以外的蛋白质的增加或减少，新蛋白质的诱导被确认。通过电泳识别。未来，有必要分析诱导蛋白并检查这些新蛋白、Hsp 和应激之间的功能关系。