ニンニクの遺伝子導入によるウィルス抵抗性個体の作出

通过大蒜基因导入创造抗病毒个体

• 批准号: 02F00206
• 负责人: 服部 一三
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00206/
• 关键词: ニンニク; ウィルスフリー; RNA; 根端培養; RTPCR; 多芽体; 体細胞胚形成; 急速増殖法

日本における主要なニンニク品種であるホワイトロッペンを主な材料とし、これまでに本研究室で開発してきた、根端を用いた大量増殖法で得られた再分化個体の中にウィルスフリー化した個体が存在するかどうかをRTPCR法を利用して検定したところ、ウィルス量の減少は認められるが、ウィルスフリー個体は認められなかった。そこで、根端を用いる方法を少し改変して、ウィルスフリー個体を得るための実験を行った。すなわち、根端を培地上に置床し、確認された再分化個体が長さで5mmに到達するまでに、新しい培地にこの小植物体を移植し、その後多芽体へと発育させた。これらの個体を1個体ずつに分割し、個体ごとに葉をサンプリングし、別々にRNAを抽出し、これまでにニンニクに感染することが確認されているウィルス(LYSV、OYDV、SLV、GLV、GCLV,GarVs)の確認のために、それぞれに特異的なプライマーを構築し、RPTPCRを行った。その結果、親品種では確認された、OYDV,LYSV,GCLV,GarVsの4種類のウィルスの感染は小植物体の時に移植を行った個体からは検出されず、ウィルスフリー個体を簡便に作出する事ができることが明らかとなった。さらに現在、ここで用いた根端培養系を用いて、アグロバクテイリウム感染法による遺伝子導入の可能性について、検討を重ねており、これまではそれほど高い導入効率ではないがpBI121に含まれるGUSの発現が認められる個体も得られており、今後さらなる効率的な導入法の開発により、ウィルス病抵抗性個体の作出も可能となろう。

无病毒个体是通过使用根尖的大量繁殖方法获得的再分化个体之一，该方法是我们实验室迄今为止使用日本主要大蒜品种White Loppen开发的，当使用RTPCR方法检测病毒的存在时。 ，观察到病毒数量减少，但没有观察到无病毒个体。因此，我们进行了一项实验，通过稍微修改使用根尖的方法来获得脱毒植物。即，将根尖放置在培养基上，当确认的再分化个体达到5mm长度时，将该幼苗移植到新的培养基上，然后使其发育成多芽体。将这些个体分成单独的个体，对每个个体的叶子进行采样，并分别提取RNA（GarVs），我们构建了每个个体的特异性引物并进行了RPTPCR。结果，在亲本品种中确认的OYDV、LYSV、GCLV和GarVs这四种病毒的感染，在幼苗时移植的植物中并未检测到，从而可以轻松地产生病毒——很明显，这是可能的。此外，我们目前正在研究使用此处使用的根尖培养系统的农杆菌感染方法进行基因转移的可能性，并且已经观察到一些个体表达病毒，并且随着未来更有效的引入方法的开发，这将是可能的。有可能创造出对病毒性疾病具有抵抗力的个体。