運動神経の軸索伸長経路の決定に関与する因子群の探索と解析

运动神经轴突生长路径决定因素的探索与分析

基本信息

批准号：
13878158
负责人：
山本融
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13878158/
关键词：
神経発生神経回路運動神経神経分化新規因子

项目摘要

解析が最も進んでいるニワトリ胚を用い、四肢の腹側に投射する運動神経であるLMCm、および背側に投射するLMCIの両運動神経群の性質決定が確立した時期の同一個体の同一体節上の脊髄から細胞を分離し、こうして分離された単一の神経細胞からそれぞれcDNAを調製した。それぞれのcDNA中に含まれる運動神経マーカーの存在パターンを解析することにより、LMCm、およびLMCIに由来するcDNAをretrospectiveに同定した。ついで、suppressor PCR-mediated subtractionを単一細胞由来のcDNAに適応できるよう独自に改良した方法でsaサブトラクトし、LMCm細胞には発現しているが、LMCI細胞には発現していない因子が濃縮されているsubtracted libraryを作成した。さらに、このlibraryを用いて、LMCm細胞に選択的に発現している因子を、differential hybridizationによる一次スクリーニングとin situ hybridizationによる二次スクリーニングにより多数単離することに成功した。これら因子群は運動神経以外にも中枢神経系の特定領域に発現しており、各神経群の性格付けに重要な役割を果たしていることが予想された。また、運動神経選択的、LMCI選択的に発現する因子群が濃縮されたsubtracted libraryを作製し、小規模なスクリーニングを行った結果、期待される発現パターンを示す因子群が単離され、本研究のために開発した方法が普遍的に有効であることを確認した。

使用鸡胚胎，这是分析最充分的鸡胚胎，同一个体的同一体节，同时具有两个运动神经群的特征，LMCm（投射到肢体的腹侧）和 LMCI（投射到肢体的腹侧）已从上脊髓中分离出投射到背侧的细胞，并从由此分离的每个单个神经元制备cDNA。通过分析每个cDNA中包含的运动神经元标记的存在模式，回顾性地鉴定了源自LMCm和LMCI的cDNA。接下来，我们使用独特的改进方法对来自单细胞的 cDNA 应用抑制 PCR 介导的消减，从而富集在 LMCm 细胞中表达的因子，但不在 LMCI 细胞中表达。我创建了一个消减文库。此外，利用该文库，我们通过差异杂交的初级筛选和原位杂交的二级筛选，成功分离出大量在LMCm细胞中选择性表达的因子。除了运动神经之外，这些因子还在中枢神经系统的特定区域中表达，并且预计在表征每个神经群时发挥重要作用。此外，我们创建了富含一组在运动神经元和LMCI中选择性表达的因子的消减文库，并且通过小规模筛选，我们分离出了一组显示出预期表达模式的因子，这一点得到了证实。为此目的而开发的方法是普遍有效的。