造血幹細胞移植後のGVHDの病態に関与するmiRNAの同定とその役割の解析

造血干细胞移植后GVHD病理相关miRNA的鉴定及其作用分析

• 批准号: 21591233
• 负责人: 高橋 直之
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21591233/
• 关键词: 造血幹細胞移植; 臍帯血; microRNA; 遺伝子発現プロファイル; miRNA

臍帯血16検体と健常人末梢血11検体からヘルパーT細胞、細胞障害性T細胞、単球、NK細胞を分画し、各分画について炎症刺激前後の細胞よりmicroRNAを含むtotal RNAを抽出した。臍帯血、健常人末梢血のヘルパーT細胞、細胞障害性T細胞、単球について、免疫細胞の分化・活性化への関連が予想される69個のmicroRNAおよび11個の蛋白コード遺伝子mRNAの発現レベルをreal time PCR法で解析・検討した結果、20個のmicroRNAの発現が臍帯血由来細胞と健常人末梢血由来細胞の間で異なることが判明した。そのうち、3個のmicroRNAは、3分画共通、7個のmicroRNAはT細胞2分画共通の発現変化を示し、これらのmicroRNAは、臍帯血もしくは臍帯血T細胞を特徴づけるものと考えられた。また、8個のmicroRNAはMYCによる発現調節の影響が推測された。炎症刺激に対する反応は、臍帯血と健常人末梢血由来細胞とで大きく異なった。異なる挙動を示したmicroRNA、蛋白コード遺伝子mRNAは、臍帯血由来細胞の免疫学的な未熟性の分子的機序に関与することが推測された。本年度は、特徴的な挙動を示したmicroRNAの標的となりうる遺伝子について、バイオインフォマティクスを用いて解析・絞り込むとともに、実際に蛋白発現レベルの変化について検討した。現在、結果をまとめ、論文投稿中である。臍帯血移植後または骨髄移植後に急性GVHDを発症した症例のGVHD極期と回復期、およびGVHD未発症症例の末梢血サンプルを用いて同様の発現解析を予定していたが、十分な数のサンプルが集まらなかったため、行わなかった。統計的解析を行うのに十分な数のサンプルが集まり次第、解析を行う予定である。

从健康个体的 16 份脐带血样本和 11 份外周血样本中分离出辅助 T 细胞、细胞毒性 T 细胞、单核细胞和 NK 细胞，并从每个部分的炎症刺激前后的细胞中提取总 RNA，包括 microRNA。 。通过分析和研究，预测健康个体脐带血和外周血中辅助性 T 细胞、细胞毒性 T 细胞和单核细胞中 69 个 microRNA 和 11 个蛋白质编码基因 mRNA 的表达与免疫细胞分化和激活有关。通过实时PCR检测其水平，发现20种microRNA的表达在健康个体的脐带血细胞和外周血细胞之间存在差异。其中，3个microRNA显示出3个部分共有的表达变化，7个microRNA显示出2个T细胞部分共有的表达变化，并且这些microRNA被认为表征了脐带血或脐带血T细胞。此外，假设 8 个 microRNA 受到 MYC 表达调节的影响。脐带血细胞和健康个体外周血细胞对炎症刺激的反应存在显着差异。据推测，表现出不同行为的microRNA和蛋白质编码基因mRNA参与了脐带血来源细胞免疫不成熟的分子机制。今年，我们使用生物信息学来分析和缩小可能成为表现出特征行为的 microRNA 目标的基因，并实际检查蛋白质表达水平的变化。我们目前正在汇编结果并提交论文。计划使用脐带血移植或骨髓移植后发生急性GVHD的患者的GVHD峰值和恢复期样本以及未发生GVHD的患者的外周血样本进行类似的表达分析，但样本数量足够由于没有参加者，所以没有举行。我们计划在收集到足够数量的样本后进行统计分析。