免疫系における新規RNAキナーゼの生理機能

新型RNA激酶在免疫系统中的生理功能

基本信息

批准号：
21590540
负责人：
花田俊勝
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Oita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21590540/
关键词：
RNA 発生・分化免疫学

项目摘要

前年度に引き続き、T細胞特異的Clp1遺伝子欠損マウスとキナーゼ活性欠損ノックインマウスを用いて解析を行ない、今年度は特にその分子メカニズムについて検討を行なった。Clp1遺伝子欠損T細胞は胸腺における分化過程においてCD4-CD8-の早い段階で増殖分化が障害され、アポトーシスにより細胞死を起こすことが認められた。しかしながらキナーゼ活性欠損ノックインマウスにおいて胸腺分化は正常であり、末梢における成熟CD4およびCD8T細胞の細胞数も正常であった。このことより、Clp1はRNAキナーゼとして働くのみでなく、またpre-mRNA cleavage complexおよびpre-tRNA splicing complexの構成分子であることから、これらcomplexのアダプターとして機能している可能性が示唆された。実際、Clp1遺伝子欠損T細胞においてpre-mRNAのcleavage異常による転写終結部位の延長を認めた。しかしながら、成熟tRNAの量的質的変化は認められなかった。この結果より、Clp1遺伝子欠損細胞のT細胞分化障害はpre-mRNAの成熟化異常によるものと考えられた。一方、キナーゼ活性欠損ノックインマウスはT細胞を含めた血球系細胞の分化とその機能に異常を認めなかったが、モーター神経の異常による運動障害を生じた。このマウス胎児より繊維芽細胞を作成し、分子メカニズムについて検討したところ、mRNAの成熟化に異常はなく、またtRNA成熟化機構においてもpre-tRNAのsplicingに異常はなく、tRNAのアミノアシル化等にも変化は認めなかった。しかしながら、Clp1遺伝子変異細胞において異常なtRNAフラグメントの集積を認めた。これが何らかの生理機能を有し、マウスの表現型に関係しているのではとの可能性について、現在さらに詳細な検討を行なっている。

在上一年之后，使用缺乏激酶活性的T细胞特异性CLP1基因缺陷小鼠和敲门小鼠进行了分析，今年我们专门检查了它们的分子机制。发现缺乏CLP1基因的T细胞在凋亡引起的CD4-CD8和细胞死亡的早期受损。然而，缺乏激酶活性的敲入小鼠的胸腺分化是正常的，周围成熟的CD4和CD8T细胞的数量也正常。这表明CLP1不仅充当RNA激酶，而且是MRNA前切割复合物和pre-tRNA剪接复合物的组成分子，这表明它可以充当这些复合物的适配器。实际上，在缺乏CLP1基因的T细胞中，由于前MRNA的裂解异常，转录终止位点延长了。但是，未观察到成熟tRNA的定量定性变化。基于这些结果，人们认为Clp1根细胞中的T细胞分化障碍是由于前MRNA的异常成熟而引起的。另一方面，缺乏激酶活性的敲入小鼠在包括T细胞在内的血细胞系的分化和功能中没有任何异常，而是发展出运动神经异常。由该小鼠胎儿产生成纤维细胞，并检查了分子机制。 mRNA的成熟没有异常，在pre-tRNA的剪接中未发现tRNA成熟机制的异常，并且在tRNA的氨基酰基化中未观察到变化。然而，在Clp1基因突变细胞中观察到tRNA片段的异常积累。目前，我们正在进一步详细研究这可能具有某种生理功能，并且与小鼠的表型有关。