三次元的ヒト血液脳関門モデルの構築:抗アミロイド抗体作用機序の解明

三维人体血脑屏障模型的构建：阐明抗淀粉样蛋白抗体的作用机制

基本信息

批准号：
20659140
负责人：
神田隆
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

平成20年度の成果をふまえ、申請者の教室で確立したヒト脳毛細血管由来内皮細胞株とヒト血管周細胞株、および平成21年度に確立したヒト神経膠細胞不死化細胞株の3者による"Neurovascular Unit"のin vitroでの再構築モデルの確立を第1の目的とした。ゲル化した細胞外マトリックス中に、in vivoと同一の脳毛細血管を再構築しようという世界に類のない試みであり,当初より主技の確立まで相当な時間を要することが予想されたが、2年間の成果として得られたモデルはまだ不十分なものであり、本研究計画の最終目的である血液脳関門を介したβアミロイド排泄機構の基本的なデータ蓄積には至っていない。[方法と結果](1)60mmプラスティック培養皿にラットI型コラーゲンを5mmの厚さでゲル化したものを作成、その上にDiIをとりこんだ脳毛細血管由来内皮細胞を播種した。約5日間の培養継続により、脳毛細血管内皮細胞はvivoでの毛細血管網に類似する連続した管腔構造をゲル内に形成した。この上にDiO標識血管周細胞を播種し、3日間培養した。血管周細胞は脳毛細血管内皮細胞の管腔構造の周囲にはりつくように生着し、一部の血管では管腔構造の大部分を覆うに至った。(2)管腔構造を形成したヒト血液脳関門由来細胞に、アミロイド輸送に関与するトランスポーターであるLRP-1とP-glycoproteinが発現していることを確認した。本研究の意義:ヒト血液脳関門由来細胞を用いてヒト脳微小血管に極めて近似したin vitro血液脳関門モデルを作製し、アミロイドの排泄機構を見ようという世界初の試みである。血液脳関門でのアミロイド排出メカニズム探求の最良のモデルということができ、その意義は極めて大きい。2年間の本研究は、残念ながら第1段階のin vitro血液脳関門モデル作製中途で終わったが、このモデルの必要性は2年前に増して高まっているものと考える。新たな研究プロジェクトのもとで、最終目的であるアミロイド排泄機構の解明まで更なる基礎実験の積み重ねが必要である。

基于2008年的成果，申请人实验室建立了人脑毛细血管源性内皮细胞系和人血管周围细胞系，并于2009年建立了人胶质细胞永生化细胞系。首要目标是建立体外重建模型“神经血管单位”。这是世界上前所未有的在凝胶状细胞外基质中重建与体内相同的脑毛细血管的尝试，并且从一开始就预测需要相当长的时间来建立作为主要技术的模型。两年的研究成果还不够，本研究项目的最终目标——积累β-淀粉样蛋白通过血脑屏障排泄机制的基础数据尚未实现。 [方法与结果] (1)在60mm塑料培养皿中制备5mm厚的大鼠I型胶原凝胶，并将含有DiI的脑毛细血管来源的内皮细胞接种到其上。通过持续培养约5天，脑毛细血管内皮细胞在凝胶内形成类似于体内毛细血管网络的连续管腔结构。将DiO标记的血管外皮细胞接种到其上并培养3天。血管周细胞粘附并移植在脑毛细血管内皮细胞的管腔结构周围，并且在一些血管中，它们覆盖了大部分管腔结构。 (2)我们确认LRP-1和P-糖蛋白是参与淀粉样蛋白转运的转运蛋白，在形成管腔结构的人血脑屏障来源的细胞中表达。这项研究的意义：这是世界上首次尝试利用人血脑屏障来源的细胞创建与人脑微血管非常相似的体外血脑屏障模型，并研究淀粉样蛋白的排泄机制。可以说是探索淀粉样蛋白在血脑屏障排泄机制的最佳模型，意义极其巨大。不幸的是，这项为期两年的研究在第一步创建体外血脑屏障模型时中途结束，但我们相信对这个模型的需求比两年前更大。在新的研究项目下，需要进一步的基础实验来达到阐明淀粉样蛋白排泄机制的最终目标。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

B群β溶連菌感染後に脱髄型ギランバレー症候群を呈した67歳男性例.

一例 67 岁男性感染 B 族 β 溶血性链球菌后出现脱髓鞘格林-巴利综合征。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Taro Hino;Takashi Kanda;TetsuyaTerasaki;他(8;9 番目);Jun-ichi Sato;神田隆;古賀道明;佐野泰照;清水文崇;前田敏彦;Sato K;神田隆;Makino S;清水文崇
通讯作者：
清水文崇

感覚障害を主徴とし、免疫グロブリン静注(IvIg)療法により速やかに改善した遠位型CIDPの46歳男性例.

一例46岁男性，患有远端CIDP，主要症状是感觉障碍，经静脉注射免疫球蛋白（IvIg）治疗后迅速好转。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
安部真彰;寺崎哲也;神田隆;神田隆;安部真彰;清水文崇;竹下幸男
通讯作者：
竹下幸男

Establishment of a New Conditionally Immortalized Human Brain Microvascular Endothelial Cell Line Retaining an In Vivo Blood-Brain Barrier Function

DOI：
10.1002/jcp.22232
发表时间：
2010-11-01
期刊：
JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
影响因子：
5.6
作者：
Sano, Yasuteru;Shimizu, Fumitaka;Kanda, Takashi
通讯作者：
Kanda, Takashi

拘束性換気障害を呈したdiffuse idiopathic skeletal hyperostosis

弥漫性特发性骨骼肥厚伴限制性通气障碍

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
脳と神経 60
影响因子：
0
作者：
Ohtsubo;M.;安部真彰
通讯作者：
安部真彰

臨床所見で中枢性低換気を合併した家族性パーキンソン症状を示し,病理学的にTDP-43陰性のタウオパチーを認めた46歳女性剖検例

尸检病例为一名 46 岁女性，临床表现为家族性帕金森病并发中枢性通气不足，病理结果为 TDP-43 阴性 tau 蛋白病。

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nagao K;Ono K;Horie T;Nishi H;Kinoshita M;Hasegawa K;Kita T;神田隆;清水文崇;柏村陽子;春木明代;田崎彩子;竹下幸男;田崎彩子;神田隆;神田隆;川井元晴;根来清;川井元晴;古賀道明;小笠原淳一;佐野泰照;尾本雅俊;清水文崇;柏村陽子;安部真彰;前田敏彦;尾本雅俊
通讯作者：
尾本雅俊