ヒト末梢神経神経内膜由来内皮細胞培養系の確立とヒト血液神経関門培養モデル作成の試み

人周围神经内膜源性内皮细胞培养体系的建立并尝试建立人血神经屏障培养模型

• 批准号: 13035012
• 负责人: 神田 隆
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13035012/
• 关键词: 血液神経関門; 神経免疫学; サイトカイン; 血管内皮細胞; 血液脳関門; 炎症性ニューロパチー; 細胞生物学; 免疫性ニューロパチー; 末梢神経障害; 抗糖脂質抗体; ギラン・バレー症候群; VEGF; NF-kB

血液脳関門(BBB)と比較して末梢神経系のバリアーシステムである血液神経関門(BNB)の研究は遅れをとっているが、その原因の一つは、BNBの主座である末梢神経神経内膜由来内皮細胞(PnMEC)の培養がその技術的困難から長らく成功していかったことにある。研究者らはこの数年来ウシPnMECを用いてBNBのモデルを作成し、いくつかの業績をあげてきたが、分子レベルでのバリアー破綻・修復機序の解明にはヒト細胞の入手が急務と考え、この2年間の目標をBNBを構成するヒト末梢神経神経内膜微小血管内皮細胞(HPnMEC)の大量純培養法の確立においた。培養液を含む培養条件の調整の結果、剖検材料を用いての同細胞の培養が可能となった。剖検坐骨神経または馬尾神経の神経内膜組織を分離し、我々の開発したウシPnMEC培養法(J Neurosci Res 1997)を一部改変した手法に基づいて酵素処理を行った。10-21日後に純粋なHPnMECのみからなるコロニーをクローニングし、これからHPnMECのmassを得た。HPnMECはcontact inhibitionを示す単層を成し、Dil-Ac-LDLとりこみおよびvon Willebrand抗原陽性で、ウシ脳毛細血管由来内皮細胞(BMEC)やウシPnMECと同じく細長いfibroblastに類似した形態を示した。培養条件の調整により、ヒトPnMECも純培養が可能であることが初めて示されたが、純粋なコロニーの収率が充分ではなく、cell massを使っての生化学的分析までは未だ至っていない。しかし、ある程度の長期にわたって培養可能な、ほぼ純粋なヒトPnMECが得られた意義は大きく、今後のBNBの細胞学的研究や炎症性ニューロパチーの治療法の開発にあたって大きな寄与をなすものと考えられる。

与血脑屏障（BBB）相比，对周围神经病学屏障系统的血液神经系统（BNB）的研究已被延迟，但原因之一是外周神经系统，这是该系统的主要位置，这是该系统的主要位置BNB是因为子宫内膜内皮细胞（PNMEC）的培养因其技术困难而成功。研究人员已经使用Cow PNMEC创建了BNB模型，并取得了一些成就，但是迫切需要获得人类细胞来阐明屏障崩溃和修复机制。建立一种构成BNB的人类周围神经神经子宫内膜微动细胞（HPNMEC）的大规模培养方法。由于调整了含有培养溶液的培养条件，可以使用解剖材料培养细胞。基于一种分离神经神经或神经神经组织的方法进行了酶处理，我们开发了牛-PNMEC培养方法（J Neurosci Res 1997），我们开发了。 10-21天后，他克隆了一个仅由纯HPNMEC组成的殖民地，并获得了HPNMEC的质量。 HPNMEC是一个表示接触抑制的单层。第一次表明，人类PNMEC也可以通过调整培养条件来成为纯培养物，但是纯菌落的产量不够，并且尚未达到使用细胞质量的生化分析。但是，可以长期培养的几乎纯粹的人类PNMEC的重要性被认为是对未来BNB病态研究的主要贡献和炎症性神经治疗的发展。

项目成果

Takashi Kanda et al.: "Sera from Guillain-Barre patients enhance leakage in blood-nerve barrier model"Neurology. 60. 301-306 (2003)

Takashi Kanda 等人：“来自吉兰-巴利患者的血清增强了血神经屏障模型中的渗漏”神经病学。

神田 隆: "神経精神疾患治療のEBM.慢性炎症性脱髄性多発根ニューロパチー"脳の科学. 24. 289-295 (2002)

Takashi Kanda：“EBM 用于治疗神经精神疾病。慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经根神经病”《脑科学》24. 289-295 (2002)。

Takashi Kanda et al.: "Glycosphingolipid antigen and blood-nerve barrier"Recent Research Developments in Lipids. 5. 97-105 (2001)

Takashi Kanda 等人：“糖鞘脂抗原和血神经屏障”脂质的最新研究进展。

Kanda, T., Ariga, T: "Glycosphingolipid antigen and blood-nerve barrier"Recent Res.Dev.Lipids. 5. 97-105 (2001)

Kanda, T.、Ariga, T：“鞘糖脂抗原和血神经屏障”Recent Res.Dev.Lipids。

Hiroki Sasaguri et al.: "Slowly progressive Foix-Chavany-Marie syndrome associated with chronic herpes simplex encephalitis"J Neurol Neurosurg Psychiatry. 73. 203-204 (2002)

Hiroki Sasaguri 等人：“与慢性单纯疱疹脑炎相关的缓慢进展的 Foix-Chavany-Marie 综合征”J Neurol Neurosurg Psychiatry。