新規開発したヒト副甲状腺腫の器官培養系に於ける細胞増殖および血管新生の制御機構

新开发的人甲状旁腺瘤器官培养系统中细胞增殖和血管生成的控制机制

基本信息

批准号：
20591102
负责人：
佐藤幹二
金额：
$ 3万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

当研究室では、新規開発したヒト副甲状腺腫の器官培養系を用いて、原発性副甲状腺機能亢進症(I゜-HPT)でも続発性副甲状腺機能亢進症(II゜-HPT)でも、高リン濃度の培養液にて培養すると細胞増殖とPHPの分泌が亢進することを確認した。つまり、腎透析患者の副甲状腺における病態をin vitroで再現できた(J Bone Miner Res 26:xxx-yyy,2009)。そこで、この培養系を用いてI゜-HPTとII゜-HPTの間になんらかの違いがあるとの仮説に従い、副甲状腺腺腫より得られた組織切片を低Ca濃度および高Ca濃度の培養液で1週間ほど培養した後、total RNAを抽出し、ヒトの全遺伝子を解析できるmicroarrayを用いてカルシウムが副甲状腺細胞に影響を及ぼす影響を検討した。当然のことながら、副甲状腺でもっとも多く発現している遺伝子はPTHであり、高Ca濃度の培養液で培養すると、PTH mRNAの発現は減少した。さらに血管内皮細胞増殖因子(VEGF)やTGFβ1-induced protein (TGFBI)が高発現していた。高濃度のCa培養液で培養すると数十個の遺伝子の発現が2倍以上に増加し、また十数個の遺伝子が1/2以下に抑制された。興味深いことに、FGF-23のcoreceptorであるα-klothoの発現がI゜-HPTでもII゜-HPTでも多く発現していたが、I゜-HPTでは高Ca濃度の培養液では抑制される傾向があるのに対し、II゜-HPT由来の副甲状腺では促進的に作用していた。これらの結果は今年度の内分泌学会にて発表の予定である。また、臨床的にPTH(7-84)が高値であったI゜-HPT患者において活性型ビタミンDが著しく低値であったことにヒントを得て、PTH(7-84)がマウス腎尿細管でPTHによる1,25-(OH)2D3産生を濃度依存性に抑制することを見出した。

我们的实验室使用了新开发的人体甲状旁腺瘤的器官培养系统，证实，无论是在原发性甲状腺功能亢进症（I゜-HPT）还是次生性甲状腺功能亢进症中，PHP的细胞增殖和分泌是在高磷浓度的培养物中培养的。换句话说，肾透析患者中甲状旁腺的病理可以在体外再现（J Bone Miner Res 26：XXX-Yyy，2009）。因此，遵循以下假设：使用该培养系统在I゜-HPT和II゜-HPT之间存在一些差异，从甲状旁腺腺瘤中获得的组织切片在低和高CA浓度的培养基中进行了大约一周的培养基，然后提取了总RNA，然后提取了钙对甲状旁腺对甲状旁腺的影响。自然，PTH是甲状旁腺中最表达的基因，当在具有较高Ca浓度的培养基中培养时，PTH mRNA的表达降低。此外，高度表达了血管内皮细胞生长因子（VEGF）和TGFβ1诱导的蛋白（TGFBI）。当在高浓度的Ca培养基中培养时，几十个基因的表达增加了两倍以上，而超过十几个基因被抑制至小于1/2。有趣的是，在I゜-HPT和II゜-HPT中，α-Klotho的表达更频繁地表达，但在I゜-HPT中，它倾向于在具有高CA浓度的培养基中受到抑制，而在高甲状腺中，它来自II的甲状旁腺，从II゜-i II゜-rand gland中抑制。这些结果计划于今年在内分泌学会上提出。此外，我们发现I-HPT患者的活性维生素D显着降低，其中PTH（7-84）在临床上很高，并且发现PTH（7-84）被浓度依赖性地抑制了1,25-（OH）2D3的2d3由PTH通过小鼠肾小管中的PTH产生。