腫瘍性骨軟化症を若起した腫瘍細胞の産生するリン及びビタミンD調節因子の精製

纯化肿瘤细胞产生的磷和维生素 D 调节因子，导致肿瘤诱导的骨软化

基本信息

批准号：
07671158
负责人：
佐藤幹二
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671158/
关键词：
リン利尿因子腫瘍性骨軟化症 1α-hydroxylase

项目摘要

中胚葉系の腫瘍は、まれに骨軟化症を惹起する(文献1)。その成因としては、腫瘍細胞が腎尿細管に作用して尿中へのPの排泄を促進する因子(phosphaturic factor)と、腎尿細管での1α-hydroxylase活性を抑制する因子(1α-hydroxylase inihibitor)を産生しているためと推定されているが、その本態は不明である。我々は、このような腫瘍をヌードマウスに長期間移植した場合に、宿主ヌードマウスにも低リン血症と骨軟化症が生じることを見いだした(研究発表1参照)。そして、この腫瘍細胞を培養して、SV-40をtransfectして、cell lineの樹立をこころみた。SV-40をtransfectした細胞はすでに1年以上、継代しても増殖し続けており、細胞株が樹立できたと考えられる。この樹立細胞(AG-1)のconditioned medium中には、近位尿細管の性質を有するopposum kidney(OK)細胞への^<32>Pの取り込みを抑制する活性が認められた(研究発表2予定)。現在、このAG-1細胞の性質を検討中であるが、PTHに反応してcyclic AMPの産生が増加し、また、vascular endothelial growth factorの受容体であるflt receptorのmRNAを発現している。すなわち、骨芽細胞様と血管内皮細胞様の性質を兼ね備えており、もとの腫瘍(hemangioma)の性質を保持しているようである。さらに、この腫瘍細胞が、腎尿細管の1α-hydroxylase活性を抑制する因子をも産生しているか否かを検討した。新生仔期のマウス腎尿細管細胞を用いてPTHに反応して25-OH-D3より1,25-(OH)2D3が産生されるような初代培養系を確立した。ついで、このバイオアッセイ系を用いて、AG-1細胞のconditioend medium中には1,25-(OH)2Dの産生を抑制する活性があることを見いだした。現在、この1α-hydroxylase活性抑制作用と、32P取り込み抑制活性が同一のものであるか否か、ゲル濾過法などで検討中である。

中胚层系统的肿瘤很少引起骨质乳酸（参考文献1）。假定原因是肿瘤细胞会产生作用于肾小管上的因素，并促进P中的P中排泄，以及抑制肾小管中1α-羟化酶活性的因素（1α-羟化酶Ini抑制剂），但其真实性质是未知的。我们发现，当这种肿瘤长时间植入裸鼠时，宿主裸鼠也会出现低磷酸盐血症和骨质体（请参阅研究表现1）。然后培养肿瘤细胞，然后转化SV-40以建立细胞系。已通过SV-40转染的细胞即使通过一年多后仍在继续增殖，人们认为已经建立了细胞系。已经观察到该已建立的细胞（AG-1）的条件培养基抑制 ^<32> p的摄取，该培养基具有近端小管特性（计划用于研究表现2）的对比肾脏（OK）细胞。目前，正在研究AG-1细胞的特性，但是循环AMP的产生对PTH的响应增加，并且也表达了FLT受体的mRNA，FLT受体是血管内皮生长因子的受体。换句话说，它既具有成骨细胞状和血管内皮样性质，并且似乎保留了原始肿瘤（血管瘤）。此外，已经研究了这些肿瘤细胞是否还产生抑制肾小管1α-羟化酶活性的因素。建立了一个原发性培养系统，其中使用新生儿小鼠肾小管细胞从25-OH-D3产生了1,25-（OH）2d3。然后，该生物测定系统被用于发现AG-1细胞的孔依依迪介质中存在活性，以抑制1,25-（OH）2d的产生。当前，正在研究凝胶过滤方法是否抑制1α-羟化酶活性和32p抑制活性的1α-羟化酶活性是否相同。