分泌型スカベンジャー受容体、ガレクチン3のエンドサイトーシス機能の解析

分泌型清道夫受体半乳糖凝集素3的内吞功能分析

基本信息

批准号：
11877189
负责人：
堀内正公
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Chinese hamster ovary cell(CHO細胞)にヒトガレクチン3をトランスフェクションし(CHO-glaectin-3細胞)、種々のリガンドのエンドサイトーシス機能を検討した。まず大腸菌に発現したレコンビナントヒトガレクチン3を抗原としてウサギの抗ヒトガレクチン3ポリクローナル抗体を作成した。この抗体を用いたウェスタンブロット法でCHO-galectin-3細胞におけるヒトガレクチン3の発現を検討すると、CHO由来の内因性ガレクチン3に加え、ヒトガレクチン3が有意に発現していることが確認された。CHO-galectin-3細胞はメイラード反応後期生成物advanced glycation endproducts(AGE)、アセチル化LDLなどの変性蛋白質を活発に細胞内に取り込んだ。AGEの細胞取り込みは、アセチル化LDLで抑制され、逆にアセチル化LDLの細胞取り込みはAGEにより有意に抑制された。従ってこれらのリガンドは共通の受容体を介して細胞に取り込まれていることが予想される。しかしガレクチン3は細胞貫通部位を持たない分泌蛋白質であることから、それ自身が受容体として機能しているという証拠は得られていない。ガレクチン3は膜蛋白質であるマック2に結合しているといわれており、今後ガレクチン3・マック2複合体が受容体として機能しているかどうかを検討する予定である。また、ガレクチン3発現によりマクロファージスカベンジャー受容体の様な他のスカベンジャー受容体の発現が誘導された可能性があり、この可能性も検討する予定である。

用人半乳糖凝集素3（CHO-glaectin-3细胞）转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞），并研究各种配体的内吞功能。首先，以大肠杆菌中表达的重组人半乳糖凝集素3为抗原，制作了兔抗人半乳糖凝集素3多克隆抗体。使用该抗体通过Western blotting检测CHO-galectin-3细胞中的人galectin-3的表达，结果确认除了来自CHO的内源性galectin-3以外，人galectin-3也显着表达。 CHO-galectin-3 细胞主动掺入变性蛋白质，例如晚期糖基化终产物 (AGE)、美拉德反应的晚期产物和乙酰化 LDL。乙酰化LDL抑制细胞对AGE的摄取，相反，AGE显着抑制细胞对乙酰化LDL的摄取。因此，预计这些配体通过共同受体被吸收到细胞中。然而，由于半乳糖凝集素3是一种分泌蛋白，不具有细胞穿透位点，因此没有证据表明其本身具有受体功能。据说Galectin-3与膜蛋白Mac2结合，我们计划在未来研究Galectin-3/Mac2复合物是否作为受体发挥作用。此外，galectin-3 的表达可能诱导了其他清道夫受体（例如巨噬细胞清道夫受体）的表达，我们也计划研究这种可能性。