コレステロールエステルのステロイド産生臓器への選択的輸送系の細胞遺伝学的解析

胆固醇酯选择性转运系统至类固醇生成器官的细胞遗传学分析

基本信息

批准号：
09877200
负责人：
堀内正公
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877200/
关键词：
HDL コレステロールエステル選択的輸送系ステロイド生産臓器

项目摘要

副腎皮質のステロイド産生臓器としての機能発現には、ホルモン原料であるコレステロールをコレステロールエステル(CE)として常時細胞内に貯蓄しておくことが必須である。一般には、このCEはLDL(低比重リポタンパク質)を受容体介在エンドサイトーシスしたものに由来すると考えられていた。しかし、最近、動物を用いたin vivoの実験から、実際はHDL(高比重リポタンパク質)のCEの選択的輸送系(selective holesterol ester uptake)が非常に優位に作動していることが判明した。さらに最近、このCEの選択的輸送系がSR-BI(type I, class B scavenger receptor)と呼ばれる細胞膜分子によって担われていることが証明され、にわかに注目されている(Acton et al., Science 271:518-520,1996)。しかし、HDL粒子のコアに存在するCEが、選択的に細胞質へ移行するには、何らかの機序によって細胞膜を通過する必要があり、細胞生物学的に一見奇異且つ新規なこの現象が、SR-BI単独で行われているかは不明である。これに対し我々は、HDL-CEの副腎皮質細胞への選択的輸送系を、HDLの細胞への結合、CEの細胞内への移行、及びCEの細胞内輸送、の三つの過程に分けて考え、それぞれの経路の変異株を細胞遺伝学的に分離・解析し、その分子レベルでのメカニズムを解明することによって、マシナリーの同定を試みた。CEに構造的に類似した毒素(25-ヒドロキシコレステロールオリエント)をHDL粒子に組み込み、これを突然変異剤処理した副腎皮質細胞(Y-1細胞)と保温して生き残る変異株を選別した。現在、この細胞のスクリーニングが進行中であり、得られた変異株を細胞生物学的に解析し、変異部位を同定すれば、発現クローニングによって目的の分子マシナリーを解明することが可能である。今後、各過程の変異株の分離とその解析、更に変異分子の同定を並行して行っていく。

为了使肾上腺皮质发挥类固醇生成器官的功能，必须将激素原料胆固醇以胆固醇酯（CE）的形式持续储存在细胞内。一般认为，这种CE来源于受体介导的LDL（低密度脂蛋白）的内吞作用。然而，最近使用动物进行的体内实验表明，HDL（高密度脂蛋白）的CE选择性转运系统（选择性胆固醇酯摄取）实际上占主导地位。此外，最近，已经证明CE的这种选择性转运系统是由一种称为SR-BI（I型，B类清道夫受体）的细胞膜分子执行的，该分子突然引起了人们的关注（Acton等人，Science 271）：518-520，1996）。然而，存在于HDL颗粒核心的CE为了选择性地迁移到细胞质，必须通过某种机制穿过细胞膜，而这种在细胞生物学中看似奇怪且新颖的现象，目前还不清楚BI是否正在独自做这件事。相比之下，我们将HDL-CE进入肾上腺皮质细胞的选择性转运系统分为三个过程：HDL与细胞的结合、CE转移到细胞内以及CE的细胞内转运，我们试图通过细胞遗传学分离和分析来鉴定该机制。每个途径的突变菌株并在分子水平上阐明其机制。将结构与CE（25-羟基胆固醇方向）相似的毒素掺入HDL颗粒中，并通过与用诱变剂处理的肾上腺皮质细胞（Y-1细胞）一起孵育来选择存活的突变体。目前正在对该细胞进行筛选，如果对所得突变株进行细胞生物学分析并鉴定出突变位点，则将有可能通过表达克隆阐明所需的分子机制。未来，我们将在每个过程中分离出突变菌株，对其进行分析，并并行鉴定突变分子。