内分泌攪乱物質が核内受容体の標的遺伝子転写活性に与える影響の分子機構の解析

内分泌干扰物影响核受体靶基因转录活性的分子机制分析

基本信息

批准号：
11839032
负责人：
臼井健
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Research Institute for Production Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、各種核内受容体とGAL4のDNA結合領域(GAL4DBD)とのキメラプラスミドの構築を完成した。これらのプラスミドをGAL4-Luciferaseレポーター遺伝子(GAK-Luc)およびコントロールプラスミド(pRL-SV4,pRL-TK)とともに培養細胞(tsA201)に導入し、各種漢方薬生薬成分および化学物質ピスフェノールAを添加してレポーター活性(ルシフェラーゼ活性)の変化をルミノメーターにて検討した。その結果、培養細胞系において、いくつかの生薬に、エストロゲン受容体(Erα)、ビタミンD受容体(VDR)、PPARγに対して、疑似リガンドと成り得る成分が含まれている事が明らかになった。これらはいずれも培養細胞系において用量依存的にレポーター遺伝子の活性を上昇させた。これらの生薬成分に関してこれらに含まれる既知の化学物質について更に検討を加えて、内分泌作用を示す物質を同定する。このことは漢方薬の生薬成分にいわゆるpytoestogen(植物エストロゲン)様作用を有する成分が含まれている可能性を示すのみならず、種々の核内受容体に対して作用しうる成分が含まれている可能性を示唆するものである。一方甲状腺ホルモン受容体に対しては、甲状腺ホルモンに対してアンタゴニスチックに作用する生薬成分が存在した。またビスフェノールAはこれまで知られている、エストロゲン作用に加えて、甲状腺ホルモン受容体に対してアンタゴニスチックに作用する可能性が示唆された。

今年，我们完成了各种核受体与GAL4 DNA结合域（GAL4DBD）之间的嵌合质粒的构建。将这些质粒与GAL4-荧光素酶报告基因（GAK-Luc）和对照质粒（pRL-SV4、pRL-TK）一起引入培养细胞（tsA201）中，并添加各种草药成分和化学物质双酚A。使用光度计检查报告基因活性（荧光素酶活性）。结果表明，一些草药含有可作为培养细胞系统中雌激素受体 (Erα)、维生素 D 受体 (VDR) 和 PPARγ 的假配体的成分。所有这些都以剂量依赖性方式增加了培养细胞系统中的报告基因活性。我们将进一步研究这些草药成分中含有的已知化学物质，并鉴定出具有内分泌作用的物质。这表明中草药的草药成分中可能含有具有所谓植物雌激素(phytoestrogens)样作用的成分，而且还含有能够作用于各种核受体的成分。另一方面，对于甲状腺激素受体，存在拮抗甲状腺激素作用的生药成分。还有人提出，双酚A除了先前已知的雌激素作用外，还可能对甲状腺激素受体具有拮抗作用。