発現している遺伝子を標的とした新しい変異原検出用マウスの可能性

针对表达基因的新型诱变剂检测小鼠的可能性

基本信息

批准号：
10878080
负责人：
小野哲也
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、環境変異原物質のリスクをよりヒトに近い形で評価するためにマウス個体を用いて測定する系が開発され始めているが、これまでに作られたものはすべて標的とする遺伝子が細胞内で発現していない状態であり、得られたデータを通常の発現している遺伝子に外挿するには問題を残していた。この点を改善すべく、蛍光蛋白をマウス各組織で高発現するよう工夫されて作られたGFPマウスが、突然変異検出用に使えないかどうかを検討した。用いたマウスは阪大の岡部博士より分与を受けた。このマウスは体表のすべてでGFP蛍光の強い発現が見られ、体内の各組織でも強弱はあるものの、蛍光が観察された。しかし脾、肝、胸腺、骨髄、睾丸のスメアを作り、各細胞レベルで見ると、数%から数10%の細胞がほとんど蛍光を発していないことが分かった。細胞の観察方法をさまざまに変えてみても同じ結果であった。さらに赤血球が蛍光を出していないのでこの分はノイズとして入ってくることが分かった。マウスに5Gyと8Gyの放射線を与えた後1週間後に調べた結果でも有意な差は見いだせなかった。同様のことは胎児から培養細胞を作ってみても観察され、発現が約5%のオーダーで不均一であり、ここでも10Gy放射線照射による変化は見られなかった。突然変異は0.001〜0.01%のオーダーで起こることが予想されるので、このGFPマウスは突然変異検出の目的には適当ではないと結論された。この系で使われているプロモータよりさらに強力で、全細胞での発現を促すプロモータの開発が今後の課題である。

近年来，为了以更类似于人类的方式评估环境诱变剂的风险，已经开始开发使用个体小鼠的测量系统，但迄今为止创建的所有系统都是在细胞内开发目标基因的。然而，将获得的数据外推到正常表达的基因仍然存在问题。为了改善这一点，我们研究了 GFP 小鼠是否可以用于突变检测，这种 GFP 小鼠被设计为在每个小鼠组织中高表达荧光蛋白。所用小鼠由大阪大学冈部博士提供。在该小鼠中，在所有身体表面都观察到了GFP荧光的强烈表达，并且在体内的每个组织中也观察到了荧光，尽管强度有所不同。然而，当我们对脾脏、肝脏、胸腺、骨髓和睾丸进行涂片并观察每个细胞水平时，我们发现百分之几到百分之几十的细胞几乎不发出荧光。即使改变细胞观察方法也得到相同的结果。此外，由于红细胞不发射荧光，因此发现该量作为噪声出现。当小鼠接受5Gy和8Gy辐射一周后进行检查时，没有发现显着差异。当由胎儿制备培养细胞时观察到类似的现象；表达不均匀约5%，并且在用10Gy照射后也没有观察到变化。由于预计突变发生的数量级为 0.001-0.01%，因此得出结论，该 GFP 小鼠不适合用于突变检测目的。未来的挑战是开发一种比该系统中使用的启动子更强的启动子，并促进所有细胞中的表达。