放射線のひきおこす遺伝子活性の変化

辐射引起的基因活性变化

基本信息

批准号：
61580179
负责人：
小野哲也
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61580179/
关键词：
放射線培養細胞遺伝子発現

项目摘要

大腸菌では放射線や化学物質にさらされて死の危険が生ずると新しい遺伝子群の活性が高まり死をまぬがれようとする(SOS反応)。同じような反応がはたして高等な哺乳類の細胞でもみられるかどうかを知るためにクローン化されたいくつかの遺伝子を用い放射線被曝後その転写産物であるmRNAの量に変化がないかどうか主にNorthern法を使って調べた。まず始めに、使用するマウス白血病細胞L5178Yで様々な遺伝子が通常状態で発現しているかどうかチェックしたが、調べたhouse-Keeping遺伝子(DHFR,アクチン,SOD),内因性ウィルス(AKV,xenatropic virus,VL-30,IAP),癌遺伝子(C-myc,N-myc,myb,ras)のいずれもが発現していたがC-fosの発現はみられなかった。次にこの細胞にX線あるいはガンマ線を5〜200Gy照射し、その後15及び60分後にmRNAのレベルがどのように変わるかを調べたが、調べたすべての遺伝子で有意な変化はみられなかった。ただC-fosだけは15分の時点で22KbのmRNAが一過性に現われ、その後はみられなくなった。この現象の確認のために追試を重ねるうちある時は0℃処理だけの非照射群でもC-fosの誘導のみられることが判り、その原因を追求したが、現時点ではL5178Yの培養時、瓶の底についている一部の細胞が非分裂期に入り、それがC-fos誘導の原因になっていることが孝えられる。現在この点を克服するための条件を摸索している。今後その新しい条件下でC-fosの誘導があるかどうか検討する予定である。一方遺伝子の発現と密接は関係があると考えられているDNAのメチル化がC-myc遺伝子領域で放射線照射によって変化する事を見出した。これと遺伝子発現との関連も調査中である。

当大肠杆菌因接触辐射或化学物质而面临死亡风险时，一组新基因的活性就会增加，试图避免死亡（SOS 反应）。为了查明在高等哺乳动物的细胞中是否确实观察到类似的反应，我们使用了几个克隆基因，并利用我研究的定律研究了它们暴露于辐射后转录本（mRNA）的数量是否有任何变化。首先，我们检查了所使用的小鼠白血病细胞L5178Y中各种基因是否正常表达，包括管家基因（DHFR、肌动蛋白、SOD）、内源病毒（AKV、异向病毒、VL-30、IAP）和癌基因（C- myc、N-myc、myb、ras)均表达，但未观察到C-fos的表达。接下来，我们用 5 至 200 Gy 的 X 射线或伽马射线照射这些细胞，并检查 15 分钟和 60 分钟后 mRNA 水平如何变化，但所检查的任何基因均未观察到显着变化。然而，仅对于C-fos，22Kb mRNA在15分钟时短暂出现，然后消失。为了确认这一现象，我们进行了额外的测试，结果发现即使在仅在0°C处理的未照射组中也诱导了C-fos，我们追查了其原因，但目前在培养L5178Y时，这表明底部的一些细胞进入非分裂期，这是 C-fos 诱导的原因。目前我们正在寻找条件来解决这个问题。未来，我们计划研究 C-fos 是否在这些新条件下被诱导。另一方面，我们发现C-myc基因区域中被认为与基因表达密切相关的DNA甲基化因辐射照射而改变。这与基因表达之间的关系也在研究中。