マクロファージの持つ結晶貪食作用による尿路結石防御機構の解明

巨噬细胞晶体吞噬作用阐明泌尿系结石防御机制

基本信息

批准号：
23791774
负责人：
田口和己
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23791774/
关键词：
op/opマウス M-CSF マクロファージ

项目摘要

Mφの走化因子であるColony stimulating factor-1 (Csf1)遺伝子に変異を有するマウス(B6C3Fe a/a-CsfIop/J)を導入し、heterozygous同士を交配させて、wild-type, op/opマウス各30匹程度まで繁殖した。Genotypingは、尻尾より抽出したDNAのCsf1変異領域を含むPCRを行い、制限酵素によるPCR産物の断片化をゲル電気泳動にて確認して行ったが、より簡便な方法としてTaqMan&reg ; probeを用いたSNP typing assayの技術を応用したプラマー・TaqMan&reg ; probeの設計を行い、PCRにてgenotypingを施行した。8週齢雄のop/opマウス及びwild type, heteroマウスに対し80mg/kgのグリオキシル酸を15日間腹腔内投与し、0日目、3日目、6日目、9日目、12日目、15日目で腎検体を採取した。併行して24時間蓄尿を行い、尿中シュウ酸,クエン酸,カルシウム,リン,マグネシウム排泄などの結石関連物質の測定を行った。シュウ酸カルシウム結石染色(Pizzolato染色)とMφ染色により、腎結石形成と消失の変化、Mφの動向や関連遺伝子の発現を評価した。またop/opマウスにて、生後3日目よりヒト組換えM-CSF製剤を皮下注射することにより、Mφの分化・誘導が回復することが報告されている。この性質を応用し、結石モデルマウスに対してM-CSFをグリオキシル酸と同時期に皮下投与し、より腎Mφを分化・誘導させた環境をつくった。同マウスで同様に結石形成やMφ、結石関連遺伝子の評価を行った。

引入小鼠（B6C3FE A/A-CSFIOP/J），该突变体在刺激因子-1（CSF1）基因（CSF1）基因，野生型，OP/OP小鼠，通过越过杂合的杂合大约30只动物。基因分型进行了从尾巴提取的DNA的CSF1突变区域，并使用GERU Electric游泳的酶检查了PCR产物的碎片，但使用Taqman＆Reg。 Taqman＆Reg;应用了SNP打字测定技术的探针，并在PCR上执行了基因分型。男性OP/OP鼠标和野生型8周，杂鼠80 mg/kg腹腔施用15天，0日，第3，第6，第6，第9天，第15天，第15天，第15天，收集肾脏样本。组合进行了24小时的尿液储存，并测量了与尿相关物质（例如尿酸，柠檬酸，钙，磷，磷，镁排泄等）的测量。草酸钙钙石材染色（比佐而染色）和Mφ染色以评估肾脏音石形成和消失的变化，Mφ的运动以及相关基因的表达。据报道，OP/OP小鼠通过皮下注入人类重组M-CSF的制剂从第三天出生的第三天来恢复Mφ的分化和诱导。通过应用此特性，将M-CSF与乙二醇酸同时施用到石模型小鼠的地下施用，从而创建了一个环境，在该环境中，肾脏Mφ被区分和诱导。类似地，评估了小鼠的石材形成，Mφ和相关的基因。