γδT細胞を使用した、神経芽腫幹細胞に対する免疫療法の基盤研究

γδT细胞神经母细胞瘤干细胞免疫治疗的基础研究

基本信息

批准号：
23791214
负责人：
西尾信博
金额：
$ 2.16万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23791214/
关键词：
γδT細胞神経芽腫癌幹細胞ゾレドロネート

项目摘要

3人の健常人末梢血単核球から、ゾレドロネートとIL-2を用いてγδT細胞を増幅した。その後磁気ビーズを用いてγδT細胞を純化し、以後の実験に使用した。クロミウム放出試験による細胞傷害性試験で、γδT細胞はゾレドロネートで処理した神経芽腫細胞株を傷害した。神経芽腫細胞株をEGF、FGF添加無血清培地で培養し、神経芽腫sphereを樹立した。この神経芽腫sphereは元の付着細胞と比較し、in-vitroで高いコロニー形成能を示し、また免疫不全マウス(SCIDマウス)への移植実験でも高い腫瘍形成能を呈した。これらの結果から神経芽腫sphereには神経芽腫幹細胞が濃縮されていると考えられた。γδT細胞は、ゾレドロネートで処理した神経芽腫sphereにも傷害性を示した。γδT細胞の傷害性が神経芽腫sphereの中にある神経芽腫幹細胞に対してあるのかどうかを確かめるために、まずin-vitroでのコロニーアッセイを行ったところ、γδT細胞の存在下では神経芽腫コロニー形成能が阻害された。また、SCIDマウス腎被膜下に神経芽腫sphereとγδT細胞を移植したところ、腫瘍形成が阻害された。これらの結果からγδT細胞は神経芽腫幹細胞に傷害性があることが示唆された。また、これらの傷害性は、抗γδT細胞受容体抗体とHMGCoA阻害剤であるメバスタチンにより阻害されたが、抗NKG2D抗体では阻害されなかった。この結果から、γδT細胞の傷害性はγδTCR受容体を介しており、NKG2Dを介したNK活性によるものではないことが示された。

使用唑来济酸盐和IL-2，从三个健康个体的外周血单核细胞中扩增γδT细胞。然后使用磁珠将γδT细胞纯化，并在随后的实验中使用。在通过铬释放试验的细胞毒性测试中，γδT细胞损害了用唑来膦酸盐处理的神经母细胞瘤细胞系。在补充EGF和FGF的无血清培养基中培养神经母细胞瘤细胞系，以建立神经母细胞瘤球。与原始附着的细胞相比，该神经母细胞球体在体外表现出较高的菌落形成能力，并且在免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）的移植实验中也表现出较高的肿瘤性能力。这些结果表明，神经母细胞瘤干细胞富含神经母细胞瘤球体。 γδT细胞还显示出用唑来膦酸盐处理的神经母细胞瘤球的损害。为了确定γδT细胞在神经母细胞瘤球中是否对神经母细胞瘤干细胞受损，首先进行体外菌落测定，并在存在γδT细胞的情况下抑制神经母细胞瘤菌落形成能力。此外，在SCID小鼠的肾囊下，神经母细胞瘤球和γδT细胞的移植抑制了肿瘤的形成。这些结果表明γδT细胞对神经母细胞瘤干细胞具有白细胞。此外，抗γδT细胞受体抗体和HMGCOA抑制剂Mevastatin抑制了这些损伤，而不是抗NKG2D抗体。这些结果表明，γδT细胞的病变通过γδTCR受体，而不是由于NKG2D介导的NK活性。