神経芽腫における癌幹細胞マーカーの探索

寻找神经母细胞瘤中的癌症干细胞标志物

• 批准号: 26931035
• 负责人: 林 陽子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26931035/
• 关键词: 神経芽腫; 癌幹細胞; 腫瘍マーカー

神経芽腫は胎生期の神経堤細胞を由来とする小児の固形悪性腫瘍である。悪性度の高い神経芽腫において癌幹細胞の存在が提唱されているが同定には至っていない。我々はこれまでに神経芽腫細胞株のSK-N-SH細胞を用いて形質の違いによる3タイプの細胞群を分離確立し、1タイプ細胞群(癌幹細胞との関連が示唆されている)とその他の細胞群での網羅的な遺伝子および表面マーカーの発現様式の比較解析を行い、癌幹細胞同定のためのマーカー候補を選出し同定を進めてきたが、決定的なマーカーを絞り込むことができていなかった。そこで、本研究では、神経芽腫細胞株を追加して比較することで、癌幹細胞同定のための候補マーカーの絞り込みを行うこととした。本研究では、不均一な細胞群を有する細胞株SK-N-SH、NH-12、NH-6を用い研究を進めた。癌幹細胞の特性の一つに分化能を有することがあげられるが、神経芽腫ではレチノイン酸で神経様の突起を伸ばす(分化性を示す)特性がある。この特性を利用し分化前(レチノイン酸なし)、分化後(レチノイン酸あり)で変動のあるマーカーとしてc-kitを見つけた。これまでの解析より癌幹細胞マーカー候補としていたCD44、CD133にc-kitを加えて、候補マーカーの有用性を検証したところ、CD44、CD133、c-kitのいずれも発現していない細胞群に比べるといずれか(あるいは複数)発現している細胞群では癌幹細胞様の特性が有意に高い結果が得られるが、癌幹細胞特異的な細胞群を得ることはできなかった。そこで、これまでの研究で行った網羅的解析の結果を再度考察し、あらたな候補マーカーを選出した。その結果、CD24とCD184の両方を発現している細胞において、in vitroレベルで腫瘍形成能の更新が確認された。この2つマーカーに加えて、CD44、CD133を用いたところ、癌幹細胞様の細胞群をより絞り込める結果が得られており、今後、癌幹細胞マーカー決定のための解析をさらに進めたい。

神经母细胞瘤是一种起源于胚胎神经嵴细胞的儿童实体恶性肿瘤。有人提出高度恶性的神经母细胞瘤中存在癌症干细胞，但尚未得到证实。目前我们已经利用神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞分离建立了三类具有不同性状的细胞群，并对一类细胞群（推测与癌症干细胞有关）进行了全面的比较。分析癌症干细胞和其他细胞群中基因和表面标记的表达模式，并选择和鉴定了用于识别癌症干细胞的候选标记，但我们还无法缩小最终标记的范围。因此，在本研究中，我们决定通过添加和比较神经母细胞瘤细胞系来缩小用于识别癌症干细胞的候选标记的范围。在本研究中，我们使用了具有异质细胞群的细胞系 SK-N-SH、NH-12 和 NH-6。癌症干细胞的特征之一是具有分化能力，而神经母细胞瘤则具有利用视黄酸延伸神经样突起（指示分化）的特性。利用这一特性，我们发现 c-kit 作为标记物在分化前（不含视黄酸）和分化后（含有视黄酸）发生波动。当我们将 c-kit 添加到 CD44 和 CD133（之前的分析中它们一直是癌症干细胞标记的候选标记）并验证候选标记的有用性时，我们将它们与不表达任何 CD44、CD133、尽管在表达上述任一（或多个）的细胞组中获得了显示显着更高的癌症干细胞样特性的结果，但不可能获得癌症干细胞特异性的细胞组。因此，我们重新考虑了以往研究的综合分析结果，并选择了新的候选标记。结果，在表达 CD24 和 CD184 的细胞中在体外水平证实了新的致瘤性。除了这两种标记物之外，通过使用 CD44 和 CD133，我们能够缩小癌症干细胞样细胞的范围，并且我们希望进行进一步分析以确定癌症干细胞标记物。