αディフェンシンによる腸内細菌の統御機構からみた炎症性腸疾患の病因解明と新規治療

从α-防御素对肠道细菌的调控机制阐明炎症性肠病发病机制及新疗法

• 批准号: 23390193
• 负责人: 綾部 時芳
• 金额: $ 12.06万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23390193/
• 关键词: 自然免疫; 炎症性腸疾患; αディフェンシン; クローン病; 潰瘍性大腸炎; 腸内細菌; 抗菌ペプチド; αデイフェンシン

本研究は、小腸のPaneth細胞が分泌するαディフェンシンの作用から炎症性腸疾患の病因・病態を解明して新規治療を提案することが目的である。本年度は、αディフェンシンと腸内細菌からみた殺菌及び共生メカニズムを、cryptdin およびHD5と腸内細菌との会合から解析した。Acid-Urea PAGE、western blot法、sandwich ELISA等を用いた生化学的・免疫学的解析および殺菌活性測定によって、腸内常在細菌であるLactobacillus、Bifidobacterium等と、非常在菌（病原菌）であるSalmonella、Staphylococcus等でαディフェンシンとの会合状態が異なることを示した。また、クローン病モデルマウスを用いてαディフェンシン異常による腸内共生環境の破壊 (dysbiosis)の可能性について解析した。クローン病モデルマウスのパネト細胞顆粒のcryptdinおよびcryptdin分泌量についてRP-HPLC、Tris-Tricine SDS-PAGE、Acid Urea-PAGE、westen blot法およびsandwich ELISAで解析・測定して、病理病態進展におけるαディフェンシン異常の関与を明らかにした。さらに、小腸絨毛･陰窩におけるcryptdin、MMP7、CD24等の免疫局在を解析し、幹細胞とPaneth細胞が形成するニッチ相互作用の可能性を示した。以上のように、αディフェンシンの病態関与から、クローン病の新規治療法に繋がる重要な成果を得た。本研究で得られた新知見から、αディフェンシン異常によるdysbiosisがクローン病以外にも多くの疾患に寄与すると考え、実際に移植片対宿主病 (GVHD)における病態関与を証明した。

这项研究的目的是通过小肠中潘埃斯细胞分泌的α-防御素的作用来阐明炎症性肠病的发病机理和病理，并提出新的治疗方法。今年，我们从α-防御素和肠道细菌的角度分析了杀菌和共生机制，该机制是Cryptdin和HD5与肠道细菌之间关联的。使用酸性尿素页，蛋白质印迹法，夹心ELISA等的生化和免疫学分析以及杀菌活性测量表明，肠道细菌乳杆菌，双铁杆菌等α-防御素的关联状态有所不同。使用克罗恩病模型小鼠分析了由异常α-防御素引起的肠道共生环境。使用RP-HPLC，Tris-tricine SDS-PAGE，ACID尿素页，Westen Blot方法和Sandwich ELISA分析并测量了克罗恩病模型小鼠Paneto细胞颗粒中的加密蛋白和加密蛋白分泌量，以澄清α-芬氏蛋白质替代性病理学的参与。此外，分析了小肠绒毛和隐窝中隐丁，MMP7，CD24等的免疫定位，表明干细胞和泛细胞形成的小裂相互作用的可能性。如上所述，α-防御素的病理参与取得了重要的结果，从而导致了克罗恩病的新治疗方法。在这项研究中获得的新发现表明，除克罗恩氏病以外，由α-防御素异常引起的营养不良导致了许多其他疾病，并证明它参与了移植物抗宿主病（GVHD）的病理学。

项目成果

Regulation of Microbiota by Antimicrobial Peptides in the Gut

• DOI: 10.1159/000324625
• 发表时间: 2011-01-01
• 期刊: RECENT ADVANCES IN TONSILS AND MUCOSAL BARRIERS OF THE UPPER AIRWAYS
• 作者: Masuda, Koji;Nakamura, Kiminori;Ayabe, Tokiyoshi
• 通讯作者: Ayabe, Tokiyoshi

Deficiency of secreted cryptdin-4 detected in a mouse model of Crohn’s disease using a new sandwich ELISA

使用新型夹心 ELISA 在克罗恩病小鼠模型中检测到分泌型 cryptdin-4 缺乏

• 作者: Nakamura K;Kuroishi A;Kono M;Kobayashi M;Ayabe T.
• 通讯作者: Ayabe T.

Bactericidal Activity of Mouse α-Defensin Cryptdin-4 Predominantly Affects Noncommensal Bacteria

• DOI: 10.1159/000322037
• 发表时间: 2011-01-01
• 期刊: JOURNAL OF INNATE IMMUNITY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Masuda, Koji;Sakai, Naoki;Ayabe, Tokiyoshi
• 通讯作者: Ayabe, Tokiyoshi

Development of antifibrotic therapy targeted to stellate cells for intestinal fibrosis in Crohn's disease

针对克罗恩病肠纤维化的星状细胞抗纤维化疗法的开发

• 作者: Konno M;Nakamura K;Maruyama K;Ayabe T.
• 通讯作者: Ayabe T.

Paneth Cells Regulate Both Chemotaxis of Immature Dendritic Cells and Cytokine Production from Epithelial Cells

潘氏细胞调节未成熟树突状细胞的趋化性和上皮细胞的细胞因子产生

• DOI: 10.1620/tjem.227.39
• 发表时间: 2012
• 期刊: The Tohoku Journal of Experimental Medicine
• 作者: Ito T;Ayabe T;Ishikawa C;Inaba Y;Tanabe H;Maemoto A;Kono T;Ashida T;Fujiya M;Kohgo Y.
• 通讯作者: Kohgo Y.