単一巨大リポソームによる開口放出様の膜融合の可視化解析

单个巨型脂质体的胞吐样膜融合的可视化分析

基本信息

批准号：
15K07033
负责人：
田所哲
金额：
$ 3.16万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15K07033/
关键词：
リポソーム開口放出膜融合 SNARE

项目摘要

マスト細胞には、炎症性メディエーターを含む分泌顆粒がある。細胞が抗原を感知すると、分泌顆粒が形質膜と融合して、内容物を細胞外に放出する（開口放出）。この開口放出の膜融合過程には、SNAREと呼ばれるタンパク質群が重要な役割を果たしている。我々は、形質膜上のSNAREタンパク質（SNAP-23/syntaxin-3）と分泌顆粒上のSNAREタンパク質（VAMP-8）を、それぞれ微小リポソームに組み込むことで、リポソーム間で膜融合が引き起こされることを明らかにした。本研究では、これらのSNAREタンパク質を巨大リポソームに組み込むことで、SNARE依存性の膜融合の可視化解析を行うことを目的とした。無細胞タンパク質合成系を利用することで、巨大リポソームにsyntaxin-3を外向きに組み込むことに成功した。しかしながら、SNAP-23とVAMP-8に関しては合成量が少なく条件を変えても改善がみられず、リポソームに組み込むまでには至らなかった。そこで無細胞タンパク質合成系を利用した方法ではなく、Yanagisawaらが報告した精製タンパク質を用いる方法で、巨大リポソームへの再構成を試みた。その結果、SNAP-23とsyntaxin-3が組み込まれた巨大リポソームと、VAMP-8が組み込まれた巨大リポソームを作製することに成功した。今後はリポソームに組み込まれたSNAREタンパク質の配向性を決定して、SNARE依存性の膜融合の可視化解析へと進める予定であったが、研究代表者が転職により科研費応募資格を喪失することになり、研究は中途で廃止申請を行った。

肥大细胞含有含有炎症介质的分泌颗粒。当细胞感觉抗原时，分泌颗粒与质膜融合，细胞外释放含量（开放释放）。一组称为SNARE的蛋白质在开放释放的膜融合过程中起着重要作用。我们已经表明，将分泌颗粒（VAMP-8）上的质膜（SNAP-23/Syntaxin-3）和SNARE蛋白掺入微脂质体上，将蛋白质纳入质膜体，从而诱导脂质体之间的膜融合。这项研究旨在通过将这些编蛋白掺入巨型脂质体中来可视化依赖性的膜融合。通过利用无细胞蛋白质合成系统，Syntaxin-3成功地掺入了巨型脂质体中。但是，即使在更改了少量合成含量和条件之后，SNAP-23和VAMP-8也无法改善，并且该产物未掺入脂质体中。因此，我们不使用无细胞蛋白质合成系统，而是尝试使用Yanagisawa等人报道的纯化蛋白质重新构成巨型脂质体。结果，我们成功地创建了使用SNAP-23和Syntaxin-3融合的巨型脂质体，以及具有vamp-8集成的巨型脂质体。将来，该公司计划确定整合到脂质体中的网罗蛋白的取向，并继续对SNARE依赖性膜融合进行可视化分析，但首席研究人员失去了申请科学研究基金的资格，研究人员在研究中期提出了废除申请。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

マスト細胞のSNARE依存性の膜融合におけるcomplexin IIの役割

复合蛋白 II 在肥大细胞 SNARE 依赖性膜融合中的作用

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Satoshi Tadokoro;Yoshikazu Inoh;Mamoru Nakanishi;Naohide Hirashima;伊納義和;田所哲
通讯作者：
田所哲

Effects of PIP2 on membrane fusion between mast cell SNARE liposomes mediated by synaptotagmin2

PIP2对突触结合蛋白2介导的肥大细胞SNARE脂质体膜融合的影响

DOI：
10.1016/j.bbamem.2015.06.016
发表时间：
2015
期刊：
Biochim. Biophys. Acta-Biomembranes
影响因子：
0
作者：
Satoshi Tadokoro;Yoshikazu Inoh;Mamoru Nakanishi;Naohide Hirashima
通讯作者：
Naohide Hirashima

正電荷リポソームによるマスト細胞活性化抑制機構の解明

阐明带正电荷脂质体抑制肥大细胞活化的机制

DOI：
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
0
作者：
Satoshi Tadokoro;Yoshikazu Inoh;Mamoru Nakanishi;Naohide Hirashima;伊納義和
通讯作者：
伊納義和

マスト細胞のSNARE依存性の膜融合におけるcomplexin IIのclamp効果

复合蛋白 II 对肥大细胞 SNARE 依赖性膜融合的钳制作用

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
田所哲;平嶋尚英;楯直子
通讯作者：
楯直子

マスト細胞におけるsyntaxin-3のリン酸化による開口放出制御機構

肥大细胞中突触蛋白 3 磷酸化对胞吐作用的调节

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
田所哲;柴田哲大;天野稔朗;伊納義和;中西守;平嶋尚英;楯直子
通讯作者：
楯直子

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通讯作者：
亀川沙知

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平嶋尚英;田所哲;平嶋尚英;Yoko Nishimura;Kohei Tahara;Tahara K.;Yumiko Nagai;Hidehiro Nomura;Yosuke Morita;Yumiko Nagai;Satoshi Tadokoro;田所哲;田所　哲;山之上　潔
通讯作者：
山之上　潔