抗アレルギー活性を有するIgE標的デコイリポソーム製剤の開発

具有抗过敏活性的 IgE 靶向诱饵脂质体制剂的开发

• 批准号: 20K06996
• 负责人: 田所 哲
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kanagawa Prefectural Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06996/
• 关键词: リポソーム; アレルギー; マスト細胞; リポソーム; アレルギー; マスト細胞

花粉症や喘息などの即時型アレルギー疾患は増加傾向にあり、社会問題として取り上げれる機会が増えている。アレルギー疾患に関与するマスト細胞は、細胞内に炎症性メディエーターを含む分泌顆粒がある。抗原が細胞膜表面上のIgEを介してIgE受容体を架橋すると、外液から細胞内へのCa2+流入に続く、脱顆粒によって炎症性メディエーターが細胞外に放出され、アレルギー症状が引き起こされることになる。本研究では、IgE受容体α鎖をリポソームに組み込むことでプロテオリポソームとし、その抗アレルギー活性を検討することを目的とした。リポソームは静置水和法を用いて作製した。IgE受容体α鎖は、リポソーム共存下においてin vitroのタンパク質合成系を用いて作製した。IgE受容体α鎖の発現は、抗体を用いたウエスタンブロット及び免疫染色で確認した。作製したプロテオリポソームにおけるIgE受容体α鎖の配向性は、トリプシン処理により評価した。マスト細胞の脱顆粒は、分泌顆粒中に含まれるbeta-hexosaminidaseの放出量を指標に評価した。IgE受容体α鎖リポソームによる細胞傷害性は、細胞外に放出されたLDHを指標に評価した。ウエスタンブロット及び免疫染色の結果、IgE受容体α鎖が組み込まれたプロテオリポソームを構築することができた。構築したIgE受容体α鎖リポソームの配向性について検討したところ、内向きと外向きでランダムに組み込まれていた。また、IgE受容体α鎖リポソームは、マスト細胞に対して細胞傷害性を示さず、抗原刺激による脱顆粒を抑制した。しかしながら、抑制効果は小さいことから、IgEがリポソームに吸着し、マスト細胞表面のIgEが減少した可能性も考えられる。

干草热和哮喘等直接过敏性疾病正在上升，并且有越来越多的机会将其作为社会问题解决。参与过敏性疾病的肥大细胞具有分泌颗粒，其中含有细胞内炎症介质的颗粒。当抗原通过IgE通过IgE在细胞膜表面上交叉链接时，将Ca2+倒入细胞中，导致细胞外炎症介质释放，从而导致过敏性症状。在这项研究中，目的是将Ige受体α链掺入脂质体中以形成蛋白质体，并研究其抗过敏活性。使用静水方法制备脂质体。在存在脂质体的情况下，使用体外蛋白质合成系统生产IgE受体α链。通过使用抗体进行蛋白质印迹和免疫染色来证实IgE受体α链的表达。通过胰蛋白酶化评估了产生的蛋白脂质体中IgE受体α链的取向。使用在分泌颗粒中释放的β-己糖胺酶作为指数评估肥大细胞的脱粒。 IgE受体α链脂质体的细胞毒性使用细胞外释放的LDH作为指标评估。蛋白质印迹和免疫染色允许构建结合IgE受体α链的蛋白质脂质体。当研究了构建的IgE受体α链脂质体的方向时，它们被随机地内和向外掺入。此外，IgE受体α-链脂质体没有对肥大细胞显示细胞毒性，并抑制由抗原刺激引起的脱粒。但是，由于抑制作用很小，因此IgE可能吸附在脂质体上，从而导致肥大细胞表面的IgE降低。