22q11.2欠失症候群における制御制T細胞の解析

22q11.2缺失综合征中的调节性T细胞分析

• 批准号: 19790730
• 负责人: 金谷 能明
• 金额: $ 2.4万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19790730/
• 关键词: 発生・文化; 免疫学; 臨床

del22q11.2患者のFoxp3^+T細胞数・割合、CD4^+CD25^+T細胞数・割合を検討した。患者検体および対照検体の採取de122ql1.2患者(自己免疫疾患合併・非合併)、および自己免疫疾患患者からの末梢血を採取した。年齢の一致した免疫異常および染色体異常のない先天性心臓病術後遠隔期、川崎病遠隔期、不整脈患児、また自己免疫疾患患児、および健常児、を対照とした。末梢血からの単核球分離Ficoll-Paqueを用いた密度勾配遠心分離法により単核細胞を末梢血から分離する。(1)Foxp3陽性細胞、CD4^+CD25^+制御性T細胞の解析(Flow cytometry)分離した単核細胞の細胞表面を抗CD25抗体、抗CD4抗体で染色し、また細胞の固定、細胞膜の浸透化のうえ抗Foxp3抗体で細胞内染色を行い、Foxp3^+T細胞(CD4^+,CD25^+/Foxp3^+)、CD4^+CD25^+T細胞(CD4^+/CD25^+)、Vα24^+細胞についてde122q11.2患者(自己免疫疾患合併・非合併)と対照群でFlow cytometry(EPICS)を行いdataを蓄積した。(2)末梢T細胞単離およびcDNA合成分離した単核細胞より免疫磁気ビーズ法を用いたCD3^+細胞positive selection(MACS system)を行い(97%以上の純度を確認)、-80℃に保存し、上記の凍結保存T細胞からRNA抽出キットIsogenを用いて全RNAを抽出し、このRNAを用いてFirst Stand cDNA Synthesis kitによりcDNA合成した。

我们研究了 del22q11.2 患者中 Foxp3^+ T 细胞和 CD4^+ CD25^+ T 细胞的数量和百分比。患者和对照样本的收集从患有de122ql1.2的患者（患有和不患有自身免疫性疾病）和患有自身免疫性疾病的患者中采集外周血。以年龄匹配、无免疫异常或染色体异常的先天性心脏病手术晚期、川崎病晚期、心律失常患者、自身免疫性疾病儿童和健康儿童作为对照。从外周血中分离单核细胞 使用 Ficoll-Paque 通过密度梯度离心从外周血中分离单核细胞。 （1）Foxp3阳性细胞、CD4^+CD25^+调节性T细胞分析（Flow细胞术）分离的单核细胞的细胞表面用抗CD25抗体和抗CD4抗体染色，细胞固定并透化细胞膜后，用抗Foxp3抗体进行细胞内染色。Foxp3^+T细胞(CD4^ de122q11.2 患者（有/无自身免疫性疾病）和对照组 DeFlow 中的 +,CD25^+/Foxp3^+)、CD4^+CD25^+ T 细胞 (CD4^+/CD25^+) 和 Vα24^+ 细胞进行细胞计数（EPICS）并积累数据。 (2)外周T细胞分离及cDNA合成对分离的单核细胞(确认纯度为97%以上)进行CD3^+细胞正选(MACS系统)，并保存于-80℃。使用RNA提取试剂盒Isogen从上述冷冻保存的T细胞中提取RNA，并使用First Stand cDNA合成试剂盒使用该RNA合成cDNA。