Establishment of reverse genetics in medaka

青鳉反向遗传学的建立

基本信息

批准号：
19101002
负责人：
TODO Takeshi
金额：
$ 68.89万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

To develop the system to study gene function at tissue level in medaka, we have established two methods in the present study. 1) Reverse genetics : TILLING(Targeting Induced Local Lesions IN Genome) is a reverse genetic strategy that combines random chemical mutagenesis with high-throughput discovery of induced mutations in the target genes. The method has been applied to a variety of plant and animal species. Screening of induced mutation is the most important step in TILLING. We developed the High Resolution Melting(HRM) assay, evaluated its efficacy for screening ENU-induced mutations in the medaka TILLING library. The HRM assay is fast, cost-effective, and robust in detecting variations in DNA. By HRM assay many nonsense mutations were identified and the phenotypes of these nonsense mutants confirmed their loss-of-function nature. 2) Regulation of gene expression in tissue : Infrared laser. evoked gene operator(IR-LEGO) is a microscope system optimized for heating cells at single cell level. Heat stress induces transcription of genes that are under the control of a heat shock promoter in individual targeted cells. We applied this technique to medaka fish carrying a heat shock promoter driven transgene and have succeeded the control of ectopic gene expression.

为了开发在组织水平上研究青鳉基因功能的系统，我们在本研究中建立了两种方法。 1）反向遗传学：TILLING（Targeting Induced Local Lesions IN Genome）是一种反向遗传策略，它将随机化学诱变与高通量发现靶基因诱导突变相结合。该方法已应用于多种植物和动物物种。诱导突变的筛选是TILLING中最重要的一步。我们开发了高分辨率熔解 (HRM) 测定法，评估了其在青鳉 TILLING 文库中筛选 ENU 诱导突变的功效。 HRM 检测快速、经济高效，并且在检测 DNA 变异方面稳健。通过HRM测定，鉴定出许多无义突变，并且这些无义突变体的表型证实了它们的功能丧失性质。 2) 组织中基因表达的调节：红外激光。诱发基因操作器 (IR-LEGO) 是一款针对单细胞水平加热细胞而优化的显微镜系统。热应激会诱导单个靶细胞中受热休克启动子控制的基因转录。我们将该技术应用于携带热休克启动子驱动转基因的青鳉鱼，并成功控制了异位基因表达。

项目成果

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Autonomic and cardiovascular responses to scent stimulation are altered in cry KO mice

哭泣 KO 小鼠对气味刺激的自主神经和心血管反应发生改变

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Neurosci Lett. 413
影响因子：
0
作者：
Mohd Faizul Mohd Sabri;Takahito Ono;Masayoshi Esashi;Toyoaki Nishida;Tanida M
通讯作者：
Tanida M

scidマウスと野生型マウス系統におけうるγ-H2AXフォーカス消長の比較

scid小鼠和野生型小鼠品系之间γ-H2AX焦点可能变化的比较

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
Matsui;H.;M. Koike;Y. Kondo;N. Takegawa;K. Kita;Y. Miyazaki;他8名3番目;中島裕夫
通讯作者：
中島裕夫

メダカにおける逆遺伝学的手法の確立:突然変異生成機構の分子遺伝学的解析を目指して

青鳉反向遗传方法的建立：针对突变产生机制的分子遗传学分析

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
石川智子;亀井保博;音在信治;藤堂剛
通讯作者：
藤堂剛

A rapid and easy method forthe qualitative detection of intracellular deposition of inhaled nanoparticles

一种快速简便的定性检测吸入纳米颗粒细胞内沉积的方法

DOI：
10.1016/j.nano.2011.02.004
发表时间：
2011
期刊：
Nanomedicine
影响因子：
5.5
作者：
Nakajima H;Ozaki K;Hongyo T;Narama I;Todo T
通讯作者：
Todo T

Analysis of association between GBA mutation and Parkinson's disease using medaka fish

利用青鳉鱼分析 GBA 突变与帕金森病的关联

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
Norihito Uemura;Hideaki Matsui;Tomoko Fujiwara-Ishikawa;Masato Kinoshita;Takeshi Todo;Shun-ichi Takeda;Ryosuke Takahashi
通讯作者：
Ryosuke Takahashi