N-結合型糖鎖によるラミニン-5の機能制御

N-连接糖链对 laminin-5 的功能调节

基本信息

批准号：
18890180
负责人：
福田友彦
金额：
$ 1.68万
依托单位：
Tohoku Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890180/
关键词：
癌酵素生体分子糖鎖

项目摘要

ラミニンやフィブロネクチンなどの細胞外マトリックス(ECM)は、細胞の極近傍で多様な細胞外環境を構成している。細胞-ECM間の接着を担う細胞膜表面の受容体蛋白質インテグリンによって、ECMに書き込まれた細胞の増殖、分化、形質発現などを制御する多様な細胞外環境情報が読み取られ、インテグリンの細胞内ドメインに集積する様々なシグナル伝達因子やアクチン結合蛋白質を介して、細胞内に伝達される。ほとんどのECM分子は糖タンパク質であり、その糖鎖構造は糖転移酵素などの発現パターンにより決定される。申請者は上皮系細胞が生体内で足場としている基底膜に多く含まれていて、かつ、がん転移・浸潤と深く関わると考えられる高い細胞分散活性を持つラミニン-5(LN-5)に着目した。これまでの我々の糖転移酵素に関する研究から、糖転移酵素GnT-IIIが、がん転移・浸潤と深く関わるGnT-Vのアンタゴニストであろうと考え、昨年は、GnT-IIIおよびGnT-V発現stableクローン(LN-5を高発現する胃癌由来のMKN-45細胞)を確立し、糖鎖改変によるLN-5の発現量に及ぼす影響の検討を行い、GnT-III発現細胞ではLN-5の発現量や細胞外への分泌量が減少し、逆にGnT-Vの発現細胞ではどちらも増加することを見出した。本年度は、それぞれの細胞の培養上清からLN-5を精製し、LN-5の生物活性を測定した。細胞分散活性において、GnT-III発現細胞由来のLN-5の活性はGnT-V発現細胞由来のLN-5の活性に比較して著しく低下することを見出した。このことはLN-5の活性がLN-5を修飾している糖鎖構造によって制御されていることを示している。さらに、糖鎖リモデリングによる細胞外環境の改変が可能なことを示唆している。

细胞外基质（ECM），例如层粘连蛋白和纤连蛋白构成细胞附近的各种细胞外环境。负责细胞-ECM粘附的细胞膜表面的受体蛋白整合蛋白读取了各种细胞外环境信息，这些信息可以控制写入ECM的细胞的增殖，分化和性状表达，并通过各种信号结合蛋白和肌动蛋白结合蛋白累积了肠内构元的内部整合蛋白。大多数ECM分子是糖蛋白，其聚糖结构取决于糖基化的表达模式，例如糖基转移酶。申请人专注于层粘连蛋白-5（LN-5），该laminin-5（LN-5）在基底膜中包含大量上皮细胞，该细胞充当体内的支架，并且具有高细胞分散活性，被认为与癌症转移和入侵深深相关。从我们先前关于糖基转移酶的研究中，我们认为GNT-III是GNT-V的拮抗剂，它与癌症转移和侵袭深度涉及，去年，我们确立了GNT-III和GNT-V-V-VNT-V表达稳定的克隆（MKN-45细胞）的表达级别，并表达了gglyc lnn-ln-5的表达），并构成了gGNINISINE的表达），并且是GGNINISINE consect lnn-5的表达），并表达了ln-5的表达），并表达了gn-ii II III III和GNT-45细胞。 LN-5，发现在GNT-III细胞中LN-5表达水平和细胞外分泌水平降低，相反，在GNT-V表达细胞中都增加了。在今年，LN-5从每个细胞的培养上清液中纯化，并测量LN-5的生物学活性。在细胞分散活性中，发现与源自gnt-v表达的细胞的LN-5相比，从GNT-II-5的细胞衍生的LN-5的活性显着降低。这表明LN-5的活性由修饰LN-5的聚糖结构调节。此外，这表明可以通过聚糖重塑改变细胞外环境。