亜鉛フィンガータンパク質間相互作用に基づく新規転写促進分子の創製

基于锌指蛋白-蛋白质相互作用创建新型转录促进分子

基本信息

批准号：
18710183
负责人：
今西未来
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度の結果より、転写因子GATA-1、Sp1の亜鉛フィンガードメイン同士でタンパク質間相互作用が生じており、GATA-1亜鉛フィンガー存在下において、Sp1亜鉛フィンガーのDNA結合能が上昇することが示唆された。そこで、Sp1亜鉛フィンガーのDNA結合能の上昇に寄与するGATA-1領域に関して検討を行った。GATA-1亜鉛フィンガードメインの欠失変異体および、DNA結合能の上昇を顕著に検出することのできる、Sp1亜鉛フィンガードメインを直列に連結した6-亜鉛フィンガータンパク質、Sp1ZF6を大腸菌発現系を用いて調製した。EMSAによりDNA結合能を調べた結果、GATA-1(208-304)、GATA-1(229-304)では、Sp1ZF6のDNA結合親和性の上昇が生じたが、GATA-1のC末端側の亜鉛フィンガーのみでは、その効果は認められなかった。Sp1亜鉛フィンガーのDNA結合親和性の上昇には、GATA-1のC末端側の亜鉛フィンガー領域に加えて、N-Cフィンガー間のリンカー領域が必要であり、この領域がSp1のDNA結合活性の向上を導くのに重要であることが示唆された。また、細胞内で人工転写因子として亜鉛フィンガーを利用できることも確認した。タンパク質間相互作用を利用することによって、より効果的な転写調節が期待される。天然においては、GATAファミリーは様々な転写因子と相互作用することが知られている。したがって、得られた知見は、亜鉛フィンガードメインのタンパク質間相互作用の理解に向けても、有用な情報を提供するものと考えられる。

从上一年的结果来表明，在GATA-1锌锌指的存在下，在GATA-1锌锌指的存在下，Sp1锌指的DNA结合能力从转录因子的结果中增加。 GATA-1和SP1。因此，我们检查了有助于SP1锌指DNA键合能力的GATA-1区域。 GATA-1 Zinc fighard主剂量和DNA结合能力的DNA结合能力使用SP1ZF6，使用骨球菌表达系统的6-锌指纹身SP1ZF6。由于EMSA，GATA-1（208-304）和GATA-1（229-304）的DNA结合能力增加了SP1ZF6的DNA结合亲和力，但在GATA-1的C端一侧单独手指没有识别出效果。 SP1锌指的DNA结合在GATA-1的C末端外，还需要N-C手指之间的接头区域，并且该区域改善了SP1 DNA结合活性指导很重要。还可以证实锌指可以用作细胞中的人造转录因子。通过利用蛋白质之间的相互作用，可以预期更有效的转移调整。在自然界中，已知GATA家族与各种转录因子相互作用。因此，所获得的知识被认为提供了有用的信息，以了解锌指蛋白之间的相互作用。