患者血清中の自己抗体を用いた消化器ガン診断法の開発

开发利用患者血清中自身抗体诊断胃肠癌的方法

基本信息

批准号：
18710181
负责人：
佐藤守
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18710181/
关键词：
プロテオーム血清消化器ガン自己抗体

项目摘要

本研究では血清中自己抗体を用いて診断に使える抗原タンパク質のセットの探索を目的としている。この研究において、どれだけ多くの人血清を収集できるかが鍵となる。患者血清についてはインフォームドコンセントの得られた状態での収集を行うことができた。しかしながら、正常人血清については患者群と年齢を合わせての収集が困難であったが、千葉大学病院職員の承諾の得られた方の血清を用いることができた。これまでに、大腸ガン細胞株9種でSDS-PAGE,Western Blottingによるスクリーニングを行い、特に違いの見られる細胞株1種に絞って抗原候補タンパク質の抽出を行うこととした。正常人血清、大腸ガン患者術前・術後血清を各8血清で解析を行い、正常人血清では結合せず、患者血清中の自己抗体にのみ結合する抗原タンパク質を3つ検出している。また、すべての人で必ず自己抗体が反応する抗原タンパク質があることもわかった。3つの抗原タンパク質を同定することもできた。しかし、個人差が非常に大きいため、正常人と患者を100%識別することが困難であった。今回見つけた3つの抗原候補タンパク質も正常人で検出された人は0人であったが、患者では8人中5〜6人で検出された。また、この抗原タンパク質をバリデーション研究のために細胞株からの大量精製を試みたが、もともと細胞中での存在量が少ないこともあり、大量精製が難航しバリデーション研究まで行うことができなかった。バリデーション研究用の患者血清も大腸ガン、食道ガン、胃ガン、膵臓ガンで収集することができたので、今後使用しバリデーション研究を行う。また研究を開始するにあたり、術前・術後で比較することで自己抗体が減少するのではないかと考えていたが、術後採血の時期が手術から1ヶ月程度と短いためか、あまり変化が見られなかった。これについては引き続き、退院後定期健診等でこられた方からの協力をお願いしていく。

本研究旨在寻找一组可用于利用血清中自身抗体进行诊断的抗原蛋白。这项研究的关键是能够收集多少人体血清样本。在知情同意的情况下可以收集患者血清。然而，尽管很难从患者群体和年龄组中收集正常人血清，但在千叶大学医院工作人员的同意下，我们能够使用来自个人的血清。到目前为止，我们已经利用 SDS-PAGE 和 Western Blotting 筛选了 9 种结肠癌细胞系，并决定从一种特别不同的细胞系中提取候选抗原蛋白。他们分析了来自正常人血清以及结直肠癌患者术前和术后血清的 8 个血清样本，检测到三种抗原蛋白仅与患者血清中的自身抗体结合，但不与正常人血清结合。研究还发现，所有人体内都有一种抗原蛋白，自身抗体会对其产生反应。我们还能够鉴定出三种抗原蛋白。但由于个体差异较大，一直难以100%区分正常人和患者。这次发现的三种抗原候选蛋白在 0 名正常受试者中被检测到，但在 8 名患者中的 5 至 6 名中被检测到。我们还尝试从细胞系中纯化大量该抗原蛋白用于验证研究，但由于其在细胞中的丰度较低，大规模纯化很困难，无法进行验证研究。我们还能够收集结肠癌、食道癌、胃癌和胰腺癌的患者血清进行验证研究，因此我们将来会将它们用于验证研究。另外，刚开始研究的时候，我们以为通过手术前后对比，自身抗体会减少，但可能是因为手术后抽血的时间很短，大约术后一个月，所以并没有太大的变化。没看到它。对此，我们将继续恳请出院后定期前来体检的人员配合。