臨床検査応用を目指したLC-MS/MS定量測定法の開発と基盤技術の構築

LC-MS/MS定量测量方法开发及临床检测应用基础技术构建

• 批准号: 18K07462
• 负责人: 佐藤 守
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K07462/
• 关键词: 臨床化学; ホルモン; LC/MS/MS; Vitamin D; Estrogen; Androgen; 臨床検査; 自動化; LC-MS/MS; 同時定量; 薬剤反応性; プロテオーム

臨床検査においてステロイドホルモン等の低分子代謝物の測定は抗体を用いた免疫学的測定法(イムノアッセイ)で行われてきた。しかしながら、この方法では 結合タンパク質との解離方法の違いや、使用する抗体によって類似構造体の認識能が異なることから、各施設間で測定値が異なるという問題が起こっている。低 分子代謝物は微細な構造変化でその生理活性が大きく異なることから、正確な測り分けが求められる。これらの問題点から、欧米では早くからLC-MS/MSを用いた 測定の検査応用が進められ、大手検査センターを中心に広く利用されている。実際にアメリカ臨床化学会では例年、発表演題の15%が質量分析を 用いた演題であることからも窺える。これに対し、本邦では全く利用されていないのが現状である。 そこで本研究では、この分野でイオン化効率の悪さから最も測定が難しいとされているビタミンD・エストロゲンとアンドロゲンを対象として、LC-MS/MSを使用 した定量測定法を臨床検査に応用することを第一の目的として、臨床検査において求められる非常に高度な精度・再現性・堅牢性を兼ね備えた測定法・前処理法 を確立するとともに、測定キットの開発を行っている。 現在までにビタミンD・エストロゲンの測定法における論文を報告した。特にエストロゲンの現行イムノアッセイでは抗がん剤投与検体において偽高値を示すことがわかった。アンドロゲンについては測定法の構築・測定の安定性等の検証を終了し論文化を行なっている。 また、測定キットにはキャリブレーター、クオリティーコントロールサンプル、前処理カラム、分析カラム等の様々な構成要素が存在するが、その中でも特に重要 な誘導体化試薬における特許を国内、海外で出願し、製品化を行った。

在临床测试中，使用抗体（IMNO ANASSEY）在免疫学测量方法中对低分子代谢产物（例如类固醇激素）进行测量。但是，该方法存在一个问题，即每个设施之间的测量值都不同，因为解剖方法与结合蛋白的差异以及相似结构的识别能力取决于所使用的抗体。由于由于良好的结构变化，低分子代谢物的生理活性大不相同，因此需要准确的测量。对于这些问题，在欧洲和美国，使用LC-MS/MS的测量测试已提前提前提升，主要在主要检查中心被广泛使用。实际上，美国临床化学学会表明，演讲的15％是使用质谱法的主题。另一方面，它在日本根本不使用。 因此，在这项研究中，有必要使用LC-MS/MS进行定量测量方法，以进行维生素D，雌激素和雄激素的临床测试，由于该领域的电离效率较差，因此被认为最难测量。第一个目的是建立一种测量方法和预处理方法，该方法结合了临床测试所需的非常高级的准确性，可重复性和鲁棒性，并开发了测量套件。 迄今为止，我们报告了维生素D雌激素测量的论文。发现雌激素的当前Imnoissey表明抗癌药物标本中有假的值。对于雄激素，已经停止对构建和测量方法的稳定性验证，并进行了培养。 此外，测量套件具有各种组件，例如校准器，质量控制样本，预处理柱和分析柱，其中包括特别重要的衍生试剂的专利在日本和海外进行。

项目成果

臨床化学におけるLC/MS/MS: 現状と課題

临床化学中的 LC/MS/MS：现状和挑战

• 发表时间: 2019
• 作者: Tsuchida S;Satoh M;Umemura H;Sogawa K;Takiwaki M;Ishige T;Miyabayashi Y;Iwasawa Y;Kobayashi S;Beppu M;Nishimura M;Kodera Y;Matsushita K;Nomura F;佐藤守;佐藤守
• 通讯作者: 佐藤守

質量分析による定量測定のピットフォール

质谱定量测量的陷阱

• 发表时间: 2018
• 作者: Hino K;Nishina T;Numata Y;Asagi A;Inoue T;Yoshimatsu M;Sakaguchi C;Nakasya A;Nishide N;Kajiwara T;Terao T;Nadano S;Marui K;Okujima Y;Kokubu M;Imamura Y;Kanemitsu K;Koizumi M;Kumagi T;Hiasa Y;Hyodo I;佐藤守;佐藤守;金重里沙，本木由香里，吉田美香，關谷暁子，清水直人，奥健志，森下英理子，家子正裕，野島順三;佐藤守
• 通讯作者: 佐藤守

Search for a Novel Allergen in Hen's Egg Allergy Using an IgE Immunoblotting Assay.

使用 IgE 免疫印迹分析寻找鸡蛋过敏的新型过敏原。

• DOI: 10.1159/000488144
• 发表时间: 2018
• 期刊: Int Arch Allergy Immunol
• 作者: Sogawa K;Takahashi Y;Shibata Y;Satoh M;Kodera Y;Nomura F;Tanaka T;Sato H;Yamaide F;Nakano T;Iwahashi K;Sugita-Konishi Y;Shimada A;Shimojo N.
• 通讯作者: Shimojo N.

Applications of mass spectrometry in clinical chemistry.

质谱在临床化学中的应用。

• 发表时间: 2019
• 期刊: Medical Mass Spectrometry
• 作者: Satoh M;Nomura F
• 通讯作者: Nomura F

An in-house centrifugation and membrane filtration technique for identifying microorganisms from positive blood culture bottles with high identification rates using matrix-assisted laser desorption ionization?Time-of-flight mass spectrometry: A preliminar

一种内部离心和膜过滤技术，用于使用基质辅助激光解吸电离以高识别率识别阳性血培养瓶中的微生物？飞行时间质谱：初步研究

• DOI: 10.1016/j.jiac.2019.09.017
• 发表时间: 2020
• 期刊: Journal of Infection and Chemotherapy
• 影响因子: 2.2
• 作者: Tsuchida Sachio;Murata Syota;Miyabe Akiko;Satoh Mamoru;Takiwaki Masaki;Matsushita Kazuyuki;Nomura Fumio
• 通讯作者: Nomura Fumio