コンドロイチン硫酸生合成に関わるN-アセチルガラクトサミン転移酵素の研究

N-乙酰半乳糖胺转移酶参与硫酸软骨素生物合成的研究

基本信息

批准号：
07857169
负责人：
北川裕之
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kobe Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウシ胎児血清を酵素源として本酵素の簡便なアッセイ法を開発し、このアッセイ法を用いてウシ胎児血清中の本酵素の性質を調べた。また、ウシ胎児血清中に本酵素と異なる新奇のα-GalNAc転移酵素を検出した。1.遠心カラム法を用いた簡易アッセイ法の開発とGalNAc転移酵素の反応条件の検討酵素源としてウシ胎児血清、ドナーはUDP-[^3H]GalNAc、アクセプターにはコンドロイチンを用いて酵素反応を行い、Sephadex G-25が詰まった注射筒に反応液をアプライし、その注射筒を試験管につり下げて遠心し溶出液を回収後、その放射活性を測定する簡易アッセイ方法を開発した。また、本酵素の至適pH、バッファー、金属要求性、そしてUDP-GalNAcやコンドロイチンに対するKm値を調べ、アッセイ系の確立を行った。現在、このアッセイ法を用いて、本酵素の精製を行っている。2.プロテオグリカンの糖-タンパク質結合領域に作用する新しいα-GalNAc転移酵素の発見コンドロイチン硫酸の重合に関与する上記のGalNAc転移酵素を研究している過程で、各種グリコサミノグリカンに共通である糖とタンパク質の結合領域四糖の化学合成品を糖受容体とし、ウシ胎児血清を酵素源として、コンドロイチン硫酸生合成の鍵となるGalNAc転移酵素について調べたところ、この酵素は従来から考えられていたβ-GalNAc転移酵素ではなく、α-GalNAc転移酵素である事を明らかにした。現在、このα-GalNAc転移酵素の精製のための簡易アッセイ法を開発中である。

我们以胎牛血清为酶源，开发了该酶的简单测定方法，并利用该测定方法研究了胎牛血清中该酶的性质。我们还在胎牛血清中检测到了一种与这种酶不同的新型α-GalNAc 转移酶。 1. 使用离心柱法开发简单的测定方法并研究GalNAc转移酶的反应条件以胎牛血清为酶源，UDP-[^3H]GalNAc为供体，软骨素为受体进行酶促反应, 葡聚糖凝胶我们开发了一种简单的测定方法，其中将反应溶液加入到装有G-25的注射器中，将注射器悬浮在试管中，离心，收集洗脱液，并测量放射性。此外，我们研究了该酶的最佳pH、缓冲液和金属要求，以及UDP-GalNAc和软骨素的Km值，并建立了测定系统。我们目前正在使用这种测定方法纯化这种酶。 2. 发现一种作用于蛋白多糖糖蛋白结合区的新型α-GalNAc转移酶在研究上述参与硫酸软骨素聚合的GalNAc转移酶过程中，我们发现了一种糖，发现了各种糖胺聚糖的共同点和蛋白质结合区四糖转化。当我们使用化学合成产物作为糖受体和胎牛血清作为酶源来研究硫酸软骨素生物合成的关键GalNAc转移酶时，我们发现这种酶并不是之前认为的β-GalNAc转移酶。结果表明它是α-GalNAc 转移酶。我们目前正在开发一种简单的测定方法来纯化这种 α-GalNAc 转移酶。