神経前駆細胞のエレベーター運動における微小管プラス端集積因子の役割

微管加端积累因子在神经祖细胞升降运动中的作用

基本信息

批准号：
18700340
负责人：
落合和
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research (2007)Nagoya University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18700340/
关键词：
神経前駆細胞細胞周期エレベーター運動微小管ニューロン

项目摘要

胎生期の神経前駆細胞の細胞周期依存的な核移動(エレベーター運動)のメカニズムの一端を解明するために以下の研究を行った。細胞運動において重要な役割を果たしている微小管をその先端(+端)部で制御している分子として微小管集積因子(+TIPs)が知られており、神経前駆細胞のエレベーター運動における+TIPsの挙動を脳スライス培養系を用いてライブ観察を行った。+TIPsが蛍光タンパク質とともに発現するベクターを生体内マウスの胎生13.5日目のマウス脳室にインジェクションし、子宮内エレクトロポレーション法で神経前駆細胞の+TIPsラベリングを行い、翌日まで母体内で、遺伝子発現を待ち、脳スライスを作製し、神経前駆細胞のエレベーター運動の可視化を試みた。結果、エレクトロポレーションでは蛍光タンパク質が一カ所に集中して発現(散発性がない)し、隣接する細胞の蛍光の光が干渉し、一個の神経前駆細胞の+TIPsの動きを捉えるには共焦点顕微鏡(非所有)によるタイムラプス観察の必要性が生じた。そこで、子宮内の胎児脳室にポリエチレンイミン試薬を用いて発現ベクターをトランスフェクションすることで神経前駆細胞を散発的にラベリングすることで、非共焦点顕微鏡による観察におけるスライス培養のライブ観察を可能にすることができ、神経前駆細胞のG1からS期にかけての一つ局面で+TIPs特有のコメット状の動きを捉えることができた。さらに、この方法を用いて共焦点顕微鏡(共同研究)を用いた観察においても神経前駆細胞における+TIPsの挙動が捉えることができた。この方法は従来、用いられているエレクトロポレーションによる胎児への影響や発現ベクターの局所導入による人為的な変化を観察するような結果とは違い、毒性が低く、より生体内に近い状態で観察を行えていると考えられ、生体における分子イメージングにおいて非常に有用な手法である。

进行了以下研究，以阐明胚胎时期神经祖细胞细胞周期依赖性核运动（电梯运动）的机制。微管积累因子（+TIPS）被称为控制微管的分子，这些分子在细胞运动中起着重要作用，在其尖端（+END）中起着重要作用，并使用脑切片培养系统进行实时观察，以确定在神经祖细胞的电梯运动过程中+尖端的行为。 A vector in which +TIPs are expressed together with fluorescent proteins was injected into the mouse ventricle on the 13.5th day of embryonic life of mice in vivo mice, and labeling neural progenitor cells using intrauterine electroporation, and waiting for gene expression in the maternal body until the next day, brain slices were prepared, and attempted to visualize the elevator movement of neural progenitor cells.结果，在电穿孔中，将荧光蛋白浓缩在一个位置（无偶发性），以及相邻细胞的荧光干扰，导致需要使用共聚焦显微镜（非所有）捕获延时观察，以捕获单个神经祖细胞的 +尖端运动。因此，通过用聚乙烯亚胺试剂将表达载体转染到子宫中的胎儿心室，对神经祖细胞进行了偶尔的标记，从而可以在观察过程中使用非共核显微镜进行观察过程中的Slice培养物，并可以捕获 +comet的类似于 +comet的动作。此外，当使用共聚焦显微镜观察（协作研究）观察时，还捕获了神经祖细胞中 +TIP的行为。与传统的结果观察到电穿孔对胎儿的影响和由局部引入表达载体引起的人为变化的影响，这种方法被认为是毒性较小，可以在接近身体的状态下观察到，这使其成为生物中分子成像的非常有用的方法。